[发明专利]一种无标记组胺受体H2的细胞筛选模型

权利要求书

1.一种无标记组胺受体H2的细胞筛选模型，其特征在于，建立过程为：

1）在细胞兼容的具有光学生物传感功能的384微孔板中接种HEK-293-H2细胞，接种的细胞密度为1.0 ~ 4.5 × 10⁴个/孔，细胞培养液体积为40 µL/孔，接种后细胞培养时间为18 ~ 24 h；

2）将溶解在含0.1%BSA的HBSS缓冲盐中的组胺激动剂以浓度为0.01 ~ 100000 nM加入到接种HEK-293-H2细胞的384微孔板中，检测其DMR特征信号谱；

3）将溶解在含0.1%BSA的HBSS缓冲盐中的西米替丁拮抗剂以浓度为0.01 ~ 100000 nM加入到接种HEK-293-H2细胞的384微孔板中，检测其DMR特征信号谱；

4）获得的所有DMR特征信号谱具有浓度-响应依赖关系。

2.根据权利要求1所述一种无标记组胺受体H2的细胞筛选模型，其特征在于，待测样品具有激动活性的筛选步骤如下：

1）将溶解在含0.1%BSA的HBSS缓冲盐中的组胺激动剂以浓度为0.01~ 100000 nM加入到接种HEK-293-H2细胞的384微孔板中，检测其DMR特征信号谱；

2）将待测样品以0.01 nM ~ 100 µM加入到接种HEK-293-H2细胞的微孔板中，检测其DMR信号谱；

3）关联分析步骤1）和步骤2）中的DMR信号谱，若步骤2）的DMR信号谱与1）中的DMR特征谱没有相似性，则样品没有激动活性；若具有轮廓相似性，则进行下一步骤；

4）将H2拮抗剂西米替丁以浓度0.01 ~ 100000 nM加入到接种HEK-293-H2细胞的微孔板中，预处理5 ~ 60 min，加入与步骤2）中相同浓度的待测样品，检测其DMR信号，若此DMR信号强度低于步骤2）中的DMR信号强度，则判断此样品为H2受体的激动剂。

3.根据权利要求1所述一种无标记组胺受体H2的细胞筛选模型，其特征在于，待测样品具有拮抗活性的筛选步骤如下：

1）将待测样品和组胺分别加入到接种HEK-293-H2细胞的微孔板中，待测样品浓度为0.01 nM ~ 100 µM，组胺浓度为0.01 ~ 100000 nM，检测DMR信号谱；

2）若步骤1）中待测样品不引起DMR信号谱，再向步骤1）中加入了待测样品的细胞板中继续加入与步骤1）中相同浓度的组胺，检测DMR信号谱；若此DMR信号比步骤1）中组胺的信号弱，可判断待测样品是H2受体的拮抗剂。

4.根据权利要求1所述一种无标记组胺受体H2的细胞筛选模型，其特征在于，待测样品对H2通路有调节活性的步骤如下：

1）将待测样品和组胺分别加入到接种HEK-293-H2细胞的微孔板中，待测样品浓度为0.01 nM ~ 100 µM，组胺浓度为0.01 ~ 100000 nM，检测DMR信号谱；

2）再向步骤1）中加入了待测样品的细胞板中继续加入与步骤1）中相同浓度的组胺，检测DMR信号谱，检测时间为1 ~ 60 min；若此DMR信号比步骤1）中组胺的信号在上升期、平台期和延滞期某一个阶段不同；

3）将H2拮抗剂西米替丁以浓度0.01 ~ 100000 nM加入到接种HEK-293-H2细胞的微孔板中，预处理5 ~ 60 min，加入与步骤1）中相同浓度的待测样品，检测其DMR信号，若此DMR信号谱与步骤1）中的样品的DMR信号谱一致，可判断待测样品是H2受体下游信号通路的调节剂。

5.根据权利要求4所述一种无标记组胺受体H2的细胞筛选模型，其特征在于，所述上升期为1 ~ 10 min、平台期为10 ~ 20 min和延滞期为20 ~ 60 min。