[发明专利]一种基于微量法的纤维素酶活性测定试剂盒及其方法

说明书

本发明公开了一种基于微量法的纤维素酶活性测定试剂盒及方法，该试剂盒的试剂包括提取液（Na₂HPO₄.12H₂O、NaH₂PO₄.2H₂O、水）、试剂一（羧甲基纤维素钠、水）、试剂二（醋酸、无水醋酸钠、水）、试剂三（葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、4‑氨基安替比林、叠氮钠、PBS）、试剂四（重蒸馏酚、蒸馏水）。本发明首次利用GOD‑POD偶联法检测CL活性，其原理为CL催化羧甲基纤维素钠降解产生葡萄糖，葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢；过氧化物酶催化过氧化氢氧化4‑氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在505 nm有特征吸收峰，以此反映CL活性。

技术领域

本发明属于生命科学领域，具体涉及一种基于微量法的纤维素酶活性测定试剂盒及其方法。

背景技术

纤维素酶（cellulase，CL）存在于细菌、真菌和动物体内，能够催化羧甲基纤维素降解，是一类可广泛应用于医药、食品、棉纺、环保及可再生资源利用等领域的酶制剂。

目前已有的检测纤维素酶测定方法为3，5二硝基水杨酸（DNS）显色法，该方法的缺点为1、杂质干扰强，容易受果糖、蔗糖等其他还原糖的影响；2、检测灵敏度不够高，纤维素酶活性低的样本容易检出负值；3、样本适用范围窄，不能够适用于培养细胞和血清（浆）等样本；4、检测重复性不好。

发明内容

为了克服上述现有技术存在的缺陷，本发明旨在提供一种基于微量法的纤维素酶活性测定试剂盒及其方法，具有适用范围广，检测灵敏度高，重复性好，操作简便，成本低廉等特点。

为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现：

一种基于微量法的纤维素酶活性测定试剂盒，包括以下试剂：

提取液，液体100 mL×1瓶，由Na₂HPO₄.12H₂O、NaH₂PO₄.2H₂O和水混合而成，4℃保存；

试剂一，液体6mL×1瓶，由羧甲基纤维素钠和水混合而成，4℃保存；

试剂二，液体40mL×1瓶，，由醋酸、无水醋酸钠和水混合而成，4℃保存；

试剂三，液体10ml×1瓶，由葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林、叠氮钠和PBS混合而成，4℃保存；

试剂四，液体10ml×1瓶，由重蒸馏酚和蒸馏水混合而成，置于棕色瓶中，4℃保存。

进一步的，所述提取液中所含的Na₂HPO₄.12H₂O的质量为0.436g，NaH₂PO₄.2H₂O的质量为0.1216g，水的体积为100mL。

进一步的，所述试剂一中所含的羧甲基纤维素钠的质量为0.03g，水的体积为6mL。

进一步的，所述试剂二中所含的醋酸的体积为0.134mL，无水醋酸钠的质量为0.138g，水的体积为40mL。

进一步的，所述试剂三中所含的葡萄糖氧化酶的质量为0.8mg，过氧化物酶的质量为0.4mg，4-氨基安替比林的质量为1mg，叠氮钠的质量为100mg，PBS的物质的量浓度为0.1mol/L，体积为10mL，PH为7.0。

进一步的，所述试剂四中所含的重蒸馏酚的质量为10mg，蒸馏水的体积为10ml。