[发明专利]一种高效液相荧光色谱法检测水中微囊藻毒素-LR的方法

权利要求书

1.一种高效液相荧光色谱法检测水中微囊藻毒素-LR的方法，其特征在于，是利用微囊藻毒素-LR分子受激发光照射能够发射出特定荧光、热稳定性好等理化特征，在寻找和确定出最优激发光波长和发射光波长的前提下，结合固相萃取法对水样进行过滤、富集、洗脱和浓缩等前处理，并优化高效液相色谱检测条件对水体中微囊藻毒素-LR进行快速、高灵敏的检测；具体步骤如下：

步骤一、水样的预处理

取水样1000mL，并将水样过0.45μm的水系滤膜，待固相萃取；

步骤二、活化分离柱

用甲醇5～15mL、流速2.0～5.0mL/min预洗分离柱，再用5～15mL水、流速2.0～5.0mL/min活化分离柱，并确保不让分离柱流干；

步骤三、样品富集

将预处理的1000mL水样以5～15mL/min的流速过已活化好的分离柱进行样品富集；

步骤四、干燥分离柱

先用2～10mL水以5～15mL/min流速淋洗分离柱后，再用5～15mL 20％甲醇以2～10mL/min流速再次淋洗分离柱，最后用10～30mL高纯氮气以10～30mL/min流速气推分离分离柱，并氮吹分离柱10～50min，使分离柱干燥；

步骤五、样品洗脱与浓缩

注射泵采用0.1％三氟乙酸甲醇溶液1～5mL、流速10～30mL/min进行清洗，再用0.1％三氟乙酸甲醇5～15mL、流速1～5mL/min洗脱分离柱，再将洗脱液过无水硫酸钠柱进行脱水干燥，最后用氮气5～15mL、流速10～30mL/min气推分离柱，并收集洗脱液；将收集的洗脱液在温度为35℃～45℃条件下浓缩，氮吹浓缩至1.0mL，并过0.45μm的有机滤膜，待高效液相色谱仪测定；

步骤六、测定

色谱测定条件为：采用SHIM PACK CLC-ODS色谱柱，荧光检测器的激发波长范围为249～254nm，发射波长范围为293～298nm；流动相为甲醇(0.05％三氟乙酸)：水(0.05％三氟乙酸)＝(55～65)：(35～45)(V/V)，流速0.8～1.2mL/min，柱温30～50℃，进样量10μL。

2.根据权利要求1所述的一种高效液相荧光色谱法检测水中微囊藻毒素-LR的方法，其特征在于，分离柱为C18分离柱，预洗甲醇体积为10mL、流速3.0mL/min，活化水体积为10mL、流速3.0mL/min。

3.根据权利要求1所述的一种高效液相荧光色谱法检测水中微囊藻毒素-LR的方法，其特征在于，权利要求1所述的一种高效液相荧光色谱法检测水中微囊藻毒素-LR的方法，样品富集过分离柱的上样流速为10mL/min。

4.根据权利要求1所述的一种高效液相荧光色谱法检测水中微囊藻毒素-LR的方法，其特征在于，分离柱干燥淋洗水体积为5mL、流速10mL/min，所用20％的甲醇体积为10mL、流速5mL/min，气推分离柱干燥所用的氮气体积为20mL、流速20mL/min，继续氮吹分离柱时间为25min。

5.根据权利要求1所述的一种高效液相荧光色谱法检测水中微囊藻毒素-LR的方法，其特征在于，样品洗脱过程中注射泵清洗用0.1％三氟乙酸甲醇溶液体积为2mL、流速20mL/min，分离柱洗脱用0.1％三氟乙酸甲醇溶液体积为10mL、流速2mL/min；气推分离柱所用的N₂体积为10mL、流速20mL/min。

6.根据权利要求1所述的一种高效液相荧光色谱法检测水中微囊藻毒素-LR的方法，其特征在于，洗脱液的浓缩温度为40℃。

7.根据权利要求1所述的一种高效液相荧光色谱法检测水中微囊藻毒素-LR的方法，其特征在于，样品测定过程中荧光检测器的激发波长λ_ex＝251nm，发射波长λ_em＝296nm。

8.根据权利要求1所述的一种高效液相荧光色谱法检测水中微囊藻毒素-LR的方法，其特征在于，流动相体积比为0.05％三氟乙酸甲醇溶液:0.05％三氟乙酸水溶液＝60:40，流速1.0mL/min，柱温40℃。