[发明专利]一种利用EST微卫星标记鉴别黄花牛耳朵和牛耳朵的引物及方法

说明书

本发明公开了一种利用EST微卫星标记鉴别黄花牛耳朵和牛耳朵的引物及方法。所述的引物为EST‑F：5’‑AACGGGTTGTGTTCTGACGT‑3’；EST‑R：5’‑CGATTCGAGACCCCTCTTCG‑3’。所述利用EST微卫星标记鉴别黄花牛耳朵和牛耳朵的方法为：先制备基因组DNA溶液，并以此为模板，用前述引物对基因组DNA进行PCR扩增，所得扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，当电泳图谱显示有230bp的条带时，为牛耳朵；当电泳图谱显示有210bp的条带时，则为黄花牛耳朵。本发明提供的引物及方法为鉴定黄花牛耳朵与牛耳朵提供了简便稳定的分子标记，解决了区分黄花牛耳朵与牛耳朵的问题。

技术领域

本发明涉及利用EST微卫星标记鉴别植物的方法，具体涉及一种利用EST微卫星标记鉴别黄花牛耳朵和牛耳朵的引物及方法。

背景技术

黄花牛耳朵(Primulina lutea)和牛耳朵(Chirita eburnea Hance)同为苦苣苔科报春苣苔属植物，二者形态相似，亲缘关系十分相近，在过去的分类系统中，黄花牛耳朵被认为只是牛耳朵的一个变种，直到2004年经鉴定后才被重新命名。

除了在花的形态及适应性上存在区别，两种苦苣苔植物的根状茎及叶片所含化学成分也有所不同，其中牛耳朵含有种类丰富的苯乙醇苷类化合物，但在黄花牛耳朵中却检测不到上述类型的物质。在广西民间，牛耳朵以全草入药，具有清肺止咳，补虚止血的作用，主要用来治疗肺结核、咳喘、吐血、高血压等病症。而黄花牛耳朵的花色和花形十分美观，可开发成为优良的观赏盆花，但是与牛耳朵相比，它的药用价值不高，作为中草药在民间应用较少。由于黄花牛耳朵与牛耳朵形态十分相似，只有开花的时候才能准确区分这两个物种，因此精确区分黄花牛耳朵与牛耳朵是进行有效利用这两种苦苣苔植物的前提和基础，这对于黄花牛耳朵与牛耳朵的观赏价值及药用价值的充分开发具有重要的理论意义和指导价值。

表达序列标签(Expressed Sequence Tag，EST)是指通过对cDNA文库随机选择的cDNA克隆进行大规模测序所获得的cDNA的5’端或3’端序列，反应mRNA的信息。大量的EST数据资源为微卫星(SSR)标记的开发提供了一个十分便捷的来源，不仅可以不经过构建小片段基因组文库等繁步骤就得到适合于遗传学分析的微卫星标记，即节省传统开发以SSR所需的人力物力，又为功能基因提供信息，同时也是对EST数据资源的充分利用。

由于EST来自转录区，其保守性较高，在家族和种属间的通用性比来源于非表达序列的标记更高，且具有开发简单、快捷、费用低等特点，因此EST微卫星标记已经广泛应用于植物、动物、微生物以及昆虫的物种检测与鉴定、遗传分化鉴定等方面。但目前尚未见有利用EST微卫星标记鉴别黄花牛耳朵和牛耳朵的引物及方法的相关报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种利用EST微卫星标记鉴别黄花牛耳朵和牛耳朵的引物及方法。

本发明所述的利用EST微卫星标记鉴别黄花牛耳朵和牛耳朵的引物如下：

EST-F：5’-AACGGGTTGTGTTCTGACGT-3’；

EST-R：5’-CGATTCGAGACCCCTCTTCG-3’。

本发明还提供一种利用EST微卫星标记鉴别黄花牛耳朵和牛耳朵的方法，包括以下步骤：

(1)提取待鉴定样品的基因组DNA，得基因组DNA溶液；

(2)以步骤(1)制得的基因组DNA溶液为模板，利用前述引物对基因组DNA进行PCR扩增，制得PCR扩增产物；

(3)对步骤(2)制得的PCR扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，电泳结束后，在凝胶成像仪上成像，当PCR扩增产物电泳图谱显示被测样品有230bp的条带时，则该被测样品为牛耳朵；当PCR扩增产物电泳图谱显示被测样品有210bp的条带时，则该被测样品为黄花牛耳朵。