[发明专利]人Vγ9Vδ2T细胞扩增方法与培养基

权利要求书

1.一种人Vγ9Vδ2T细胞扩增方法，其特征在于，包括：

步骤1、从人体外周血中提取外周血单个核细胞；

步骤2、提供人Vγ9Vδ2T细胞刺激扩增培养基，采用所述人Vγ9Vδ2T细胞刺激扩增培养基对所述外周血单个核细胞进行重悬，得到细胞悬液；

所述人Vγ9Vδ2T细胞刺激扩增培养基包括人Vγ9Vδ2T细胞培养基以及添加于所述人Vγ9Vδ2T细胞培养基中的膦酸类化合物；所述人Vγ9Vδ2T细胞培养基包括基础培养基以及添加于所述基础培养基中的白介素-2、白介素-15以及维生素C；

所述步骤1与步骤2的顺序可调；

步骤3、将所述细胞悬液接种到细胞培养容器中培养60-100小时；

步骤4、采用所述人Vγ9Vδ2T细胞培养基进行换液，后续培养过程均采用所述人Vγ9Vδ2T细胞培养基进行。

2.如权利要求1所述的人Vγ9Vδ2T细胞扩增方法，其特征在于，所述基础培养基为RPMI-1640培养基；所述膦酸类化合物包括唑来膦酸、依替膦酸、伊班膦酸、帕米膦酸、阿仑膦酸、利塞膦酸、米罗磷酸中的一种或多种。

3.如权利要求1所述的人Vγ9Vδ2T细胞扩增方法，其特征在于，所述步骤2中，所述细胞悬液的细胞密度为3～4×10⁶个/ml。

4.如权利要求1所述的人Vγ9Vδ2T细胞扩增方法，其特征在于，所述步骤2中，所述人Vγ9Vδ2T细胞刺激扩增培养基中，膦酸类化合物的浓度为1-1000μM；

所述人Vγ9Vδ2T细胞刺激扩增培养基与所述人Vγ9Vδ2T细胞培养基中，白介素-2的浓度为1-1000ng/ml，白介素-15的浓度为1-1000ng/ml，维生素C的浓度为10μM-800mM。

5.如权利要求1所述的人Vγ9Vδ2T细胞扩增方法，其特征在于，所述细胞培养容器为24孔板、48孔板或96孔板；所述步骤3中，将所述细胞悬液接种到细胞培养容器中培养72小时；所述步骤4的后续培养过程中，每隔48-72小时对细胞进行换液。