[发明专利]制备过表达外源基因的细胞的方法

权利要求书

1.caspase抑制剂在培养电转细胞中的应用；

优选地，所述caspase抑制剂选自caspase-1抑制剂、caspase-2抑制剂、caspase-3抑制剂、caspase-4抑制剂、caspase-5抑制剂、caspase-6抑制剂、caspase-7抑制剂、caspase-8抑制剂、caspase-8抑制剂和caspase-10抑制剂；更优选地，所述caspase抑制剂为caspase-1抑制剂、caspase-3抑制剂或caspase-7抑制剂；更优选地，所述caspase抑制剂为：

优选地，所述细胞为免疫效应细胞。

2.一种培养电转细胞的方法，其特征在于，所述方法包括在含有caspase抑制剂的培养基中培养电转后的细胞的步骤；

优选地，所述caspase抑制剂选自caspase-1抑制剂、caspase-2抑制剂、caspase-3抑制剂、caspase-4抑制剂、caspase-5抑制剂、caspase-6抑制剂、caspase-7抑制剂、caspase-8抑制剂、caspase-8抑制剂和caspase-10抑制剂；更优选地，所述caspase抑制剂为caspase-1抑制剂、caspase-3抑制剂或caspase-7抑制剂；更优选地，所述caspase抑制剂为：

优选地，所述细胞为免疫效应细胞。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法包括，电转结束后，将电转的细胞转入培养基中培养0.5-5小时，然后在所述培养基中加入所述caspase抑制剂，继续培养；优选地，加入所述caspase抑制剂后，其在培养基中的终浓度在5-100μM、优选10-80μM的范围内。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述免疫效应细胞选自T细胞、TIL、NK细胞、NK T细胞、CAR-T细胞、CIK细胞、TCR-T细胞和巨噬细胞中的一种或多种；优选选自T细胞、TIL和CAR-T细胞中的一种或多种。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述培养基为细胞培养基，优选为用于培养免疫效应细胞的培养基；优选选自CTS^TM无血清细胞培养基、DMEM培养基和RPMI1640培养基；更优选为CTS^TM无血清细胞培养基。

6.一种电转法制备表达外源基因的细胞的方法，其特征在于，所述方法包括：

1)通过电转向细胞中导入含有表达外源基因的核酸；

2)用含有caspase制剂的培养基培养步骤1)中电转了外源基因的细胞；

其中，培养电转的细胞0.5-5h、更优选0.5-3h、更优选0.5-2h、更优选1-2h，然后在所述培养基中加入所述caspase抑制剂；优选地，加入所述caspase抑制剂后，其在培养基中的终浓度在5-100μM、优选10-80μM的范围内；

优选地，所述caspase抑制剂选自caspase-1抑制剂、caspase-2抑制剂、caspase-3抑制剂、caspase-4抑制剂、caspase-5抑制剂、caspase-6抑制剂、caspase-7抑制剂、caspase-8抑制剂、caspase-8抑制剂和caspase-10抑制剂；更优选地，所述caspase抑制剂为caspase-1抑制剂、caspase-3抑制剂或caspase-7抑制剂；更优选地，所述caspase抑制剂为：

优选地，所述细胞为免疫效应细胞。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，其特征在于，所述细胞为选自以下中的一种或多种的免疫效应细胞：T细胞、TIL细胞、NK细胞、NK T细胞、CAR-T细胞、CIK细胞、TCR-T细胞和巨噬细胞；优选选自T细胞、TIL和CAR-T细胞。