[发明专利]一种绵羊多羔性状的SNP分子标记及其检测用引物组、试剂盒和应用

权利要求书

1.一种检测绵羊多羔性状方法，包括以下步骤：

1）提取待测绵羊的基因组DNA；

2）以待测绵羊的基因组DNA为模板，利用用于检测SNP分子标记的引物组中的第一引物和第二引物进行PCR扩增反应获得PCR扩增产物；

3）用SAP酶对步骤2）中获得的PCR扩增产物进行消化获得消化后的产物；

4）以消化后的产物为模板，利用用于检测SNP分子标记的引物组中的延伸引物进行延伸反应获得延伸产物；

5）对所述延伸产物进行分析，确定所述SNP位点的基因型；

所述的SNP分子标记含有位于绵羊第7号染色体上第89431097bp处多态性为C/G的核苷酸序列；

所述的SNP分子标记，含有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，所述核苷酸序列的第200bp处多态性为C/G；

所述第一引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述第二引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；

所述延伸引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；

步骤2）中所述PCR扩增反应使用的反应体系以5µL计包括：

10ng/μL基因组DNA 1µL；

10×PCR反应缓冲液 0.5µL；

25mmol/L MgCl₂ 0.4µL；

25μmol/L dNTPs 0.1µL；

0.5μmol/L PCR Primer mix 1µL；

5U/μL Taq DNA聚合酶 0.2µL；

去离子水 1.8µL。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2）中所述PCR扩增反应的程序为：

预变性95℃，2min；

变性95℃，30s；

退火56℃，30s；

延伸72℃，60s；

所述变性、退火和延伸步骤进行45个循环后；72℃保持5min。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3）中所述消化的体系以2µL计包括：

10×SAP Buffer 0.17µL；

1.7U/µL SAP 酶 0.3µL；

去离子水 1.53µL；

所述消化的程序为：37℃，40min；85℃，5min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4）中所述延伸反应的体系以2µL计包括：

10×iplex Buffer Plus 0.2µL；

iplex Terminator 0.2µL；

0.6~1.3μmol/L primer mix 0.94µL；

iplex 酶 0.041µL；

去离子水 0.619µL；

所述延伸反应的程序为：

94℃，30s；

[94℃，5s；（52℃，5s；80℃，5s）]；其中所述（52℃，5s；80℃，5s）进行5个循环，所述[94℃，5s；（52℃，5s；80℃，5s）]进行40个循环；

72℃，3min。