[发明专利]一种目标DNA富集的方法和应用

权利要求书

1.一种目标DNA富集的方法，其特征在于：包括以下步骤，

蛋白核酸复合物制备步骤，包括将同源重组酶与待测样本的单链DNA组装成稳定的蛋白核酸复合物；

同源性重组步骤，包括采用带有生物素标记的与目标DNA具有同源性的双链DNA探针与所述蛋白核酸复合物反应，在同源重组酶的作用下，双链DNA探针与单链的目标DNA结合；

生物素标记分离步骤，包括利用所述双链DNA探针中的生物素标记，将与之结合的同源性单链目标DNA分离、富集；

所述双链DNA探针采用以下方法制备获得，

采用扩增引物对待测样本的DNA进行PCR扩增，并且，在PCR扩增的过程中，采用的dATP、dGTP、dCTP和dTTP中的至少一种带有生物素标记；PCR扩增产物即双链DNA探针；其中，扩增引物能够特异性的扩增待测样本的目标DNA的全部或部分序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：还包括解组装步骤，所述解组装步骤包括，在生物素标记分离步骤之后，采用解组装试剂，使富集的单链目标DNA从蛋白核酸复合物中解离出来。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：还包括对待测样本的核酸进行变性处理，获得单链DNA。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：在进行变性处理之前或之后对待测样本进行打断处理。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述生物素标记分离步骤，具体采用亲和素修饰的磁珠进行。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述同源重组酶为RecA、RecBCD、RecF、RecO、RecR、Rad51和Mre11-Rad50中的至少一种。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述同源重组酶为RecA或Rad51。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述所述双链DNA探针的长度为50bp-100bp。

9.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述双链DNA探针，其制备方法还包括对PCR扩增产物进行打断处理，获得长度为50bp-100bp的双链DNA探针。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述双链DNA探针，其制备方法还包括对PCR扩增产物或打断处理的产物进行纯化，获得双链DNA探针。

11.根据权利要求1-10任一项所述的方法在目标DNA的测序或文库构建中的应用。

12.一种目标DNA的文库构建方法，其特征在于：包括采用权利要求1-10任一项所述的方法对目标DNA进行富集，然后再进行后续的文库构建步骤。

13.一种目标DNA的测序方法，其特征在于：包括采用权利要求12所述的文库构建方法制备测序文库，然后对制备的测序文库进行测序。