[发明专利]一种口蹄疫灭活病毒的保护剂及微胶囊疫苗的制备方法

说明书

本发明提供了口蹄疫灭活病毒抗原的保护剂，该保护剂由下列组份组成：海藻糖、棉子糖、葡聚糖、山梨醇、甘露醇、肌醇、木糖醇、聚乙二醇3350、TPGS、蜂胶；其能使抗原保存时间延长，在生产过程和冷链运输过程中保护口蹄病毒146s抗原稳定；有利于建立口蹄疫病毒抗原库，提高口蹄疫病毒抗原液中146s抗原低温储存的稳定性。本发明还提供了含有该保护剂和口蹄疫灭活病毒抗原作为芯材的口蹄疫灭活病毒微胶囊疫苗和其制备方法。该疫苗经口服或注射免疫动物，可以在8周就能产生高滴度FMDV抗体且持续时间较常规油佐剂灭活疫苗更长，更快实现免疫保护；且无需佐剂直接注射免疫，还可通过饮水或采食对动物进行预防接种，临床操作方便。

技术领域

本发明涉及兽用生物制品技术领域，具体涉及一种口蹄疫灭活病毒 的保护剂及微胶囊疫苗的制备方法。

背景技术

口蹄疫(Foot-and-mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒 (Foot-and-mouthdisease virus，FMDV)引起的偶蹄动物烈性接触性传染 病，主要危害牛、羊、猪、骆驼等，发病率极高，传播速度极快，对各 国的畜牧业有着巨大的危害。口蹄疫病毒属于小RNA病毒科，口蹄疫 病毒属。目前已知有7个血清型，A、O、C、SAT1、SAT2、SAT3、 Asia1，每个血清型又有很多亚型。我国流行3个血清型，这三个血清 型也是致病力最强、分布最广泛的，分别为A型、O型以及Asia1型。

目前，口蹄疫的防控措施主要是以广泛的大面积免疫预防为主，配 合以扑杀疫区内的病畜和易感动物并在周围10公里范围内进行环形预 防注射。疫苗接种是特异性预防FMD的有效手段，制备安全有效的疫 苗是成功地预防、控制乃至最终消灭FMD的先决条件。FMD灭活疫苗 具有良好的免疫原性，在预防和控制FMD的过程中发挥着重要作用， 但在疫苗制备过程中残余的一些宿主细胞残余蛋白、核酸、牛血清白蛋 白、化学试剂等如果不加以控制、去除，疫苗免疫接种动物则引起动物 严重副反应甚至死亡、特别是可能使动物致癌或影响肉类动物食品安 全。

当使用高纯度抗原146s颗粒，颗粒含量≥100μg/mL，纯度为90％ 以上时，可降低动物副反应，甚至不会引起动物任何副反应，但高纯度 也降低了抗原液的稳定性，即随保存时间增加抗原含量下降的现象。

口蹄疫疫苗生产环节、冷链运输、田间使用中，选择适合的温度保 存原液、半成品、成品对疫苗抗原活性或效价非常重要，但疫苗抗原活 性稳定的温度范围非常狭窄，一般在每段工艺单元完成之间、疫苗库或 抗原库、冷链运输、使用时保存在2-8℃，但不能冷冻，以避免温度升 高或低于零下破环抗原结构或活性。为保持疫苗稳定性或工艺过程中贮备抗原的稳定，多对疫苗或抗原进行冻干或冷冻，但由于灭活纯化抗原 需要加入佐剂如铝盐、油佐剂增强其免疫作用，冻干或冷冻使抗原凝聚 变性或分层，失去免疫原性和生物活性，因此冻干或冷冻不适用于口蹄 疫灭活疫苗的存储。在现实生产中有必要对口蹄疫抗原的稳定保护剂进 行研究，筛选，以便应对规模化生产大量抗原处理、贮存或抗原库稳定 需要，但不能影响后续乳化工艺配制疫苗的操作和疫苗的最终田间使 用，同时还要求选择医学或兽医学允许使用的安全疫苗抗原保护剂。

目前市场上商品化口蹄疫灭活疫苗大多为油佐剂疫苗，油佐剂苗接 种一次可产生较好和较长时间的保护作用，但在接种部位可引起严重的 不良反应，注射部位吸收不好，给肉的品质带来较大的影响，而且常规 的油佐剂疫苗需要逐只进行免疫，费事费力，容易出现漏免的情况，而 且不同的疫苗至少需要相互间隔5～7日进行免疫以免造成较大的副反 应，因此，有必要开发一种易于免疫，肉品中无残留的新型的疫苗。