[发明专利]一种定量检测茶树籽三萜皂苷的UPLC-UV-QTOF-MS/MS方法

说明书

本发明属于天然产物检测技术领域，具体涉及一种对茶树籽(Camellia sinensis(L.)O.Kuntze)中三萜类皂苷的UPLC‑PDA‑MS/MS的定量检测方法。一种定量检测茶树籽三萜皂苷的UPLC‑UV‑QTOF‑MS/MS方法，包括如下步骤：(1)取待测样品预处理；(2)取茶树籽中已知的任意1个或多个皂素化合物，制备标准品溶液；(3)将供试品溶液和标准品溶液高效液相色谱/紫外/质谱联用设备(UPLC‑PDA‑QTOF‑MS/MS)，采用串联质谱进行结构鉴定，采用外标法在PDA检测器下进行定量检测。本发明定量结果更加准确；灵敏度高；样品需要量少。

技术领域

本发明属于天然产物检测技术领域，具体涉及一种对茶树籽(Camellia sinensis(L.)O.Kuntze)中三萜类皂苷的UPLC-PDA-MS/MS的定量检测方法。

背景技术

茶树籽(Camellia sinensis(L.)O.Kuntze)具有多种生物活性，被认为是继茶叶之后的茶树另一重要资源。特别是其中的三萜皂素，不仅具有良好的表面活性和去污能力，还具有抗菌消炎、抗肿瘤、改善酒精引起的肠胃损伤、抑制胃排空、促进植物对微量元素的吸收等生物药理功能。目前已从中国、日本、印度、斯里兰卡等国家的茶树种子种先后分离到50多种三萜皂素类物质，但结构相似，极性相近，为分离纯化和检测鉴定带来的很大困难，严重阻碍了对这类化合物的深入研究和开发应用。

目前对茶树籽皂素的检测尚没有理想的定量检测方法。《出口茶皂素中皂甙含量的测定》(进出口行业标准SN/T1852-2006)采用重量法，即先测得皂苷元质量，再换算成皂苷质量分数。该法只适合测含量为30％-70％的茶皂苷样品，样品需要量较大，耗时长，误差大，不适合少量样品的检测。浓硫酸(或高氯酸)-香草醛比色法是测定皂素的常用方法，但是容易受到样品中其他杂质的干扰，使检测结果偏高；另外无法准确定量皂素单体化合物。目前急需建立一套针对茶籽皂素的有效的定量检测方法，以利于今后的研究和产品开发。

发明内容：

本发明要解决的问题是建立一种UPLC-UV-QTOF-MS/MS(超高效液相色谱-紫外-四级杆串联飞行时间质谱联用)的检测方法，对茶树籽中的皂素进行定量检测。

一种定量检测茶树籽三萜皂苷的UPLC-UV-QTOF-MS/MS方法，包括如下步骤：

(1)取待测样品干燥磨碎，过筛，以甲醇或乙醇水溶液提取，可直接用于检测；或将粗提取液浓缩后经过正己烷或石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，将正丁醇相进一步用大孔树脂或沉淀法纯化总皂素部分，再进行检测；

(2)取茶树籽中已知的任意1个或多个皂素化合物，制备标准品溶液；

(3)将供试品溶液和标准品溶液高效液相色谱/紫外/质谱联用设备(UPLC-PDA-QTOF-MS/MS)，采用串联质谱进行结构鉴定，采用外标法在PDA检测器下进行定量检测：

色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(1.8μm,150mm×2.1mm i.d.,Waters)；

色谱条件为：流动相A(0.1％甲酸/水)，B相(0.1％甲酸/乙腈)；梯度洗脱，0-4min,梯度洗脱，(32-35％)–(35-38％)B；4-32min,等度洗脱(35-38％)B；32-58min,梯度洗脱，(35-38％)–(43-48％)B；58-60min,等度洗脱，(32-35％)B。柱温，25℃；流速，0.2-0.3mL/min；进样量，5μL；检测波长：205-215nm。

质谱条件为：采用负离子扫描模式；扫描范围：m/z 100-2000；雾化气(GS1)：50psi；