[发明专利]阿德呋啉的免疫胶体金检测卡及其制备方法

说明书

本发明阿德呋啉的免疫胶体金检测卡及其制备方法,涉及β‑肾上腺素受体激动剂检测技术领域。本发明的检测卡外壳中的试纸条，由PVC胶板、样品垫、胶体金结合垫、包被膜和吸水垫组成；胶体金膜为含阿德呋啉单克隆抗体的玻璃纤维素膜，包被膜是硝酸纤维素膜，其上设有T线和C线，T线包被有阿德呋啉蛋白质偶联物，C线包被有羊抗鼠IgG抗体。本发明有效用于快速检测阿德呋啉，方便、快捷、结果准确。

技术领域

本发明涉及动物源食品添加剂检测技术领域，特别是涉及阿德呋啉的免疫胶体金检测卡及其制备方法。

背景技术

当前由艾美耳属球虫引起鸡球虫病的危害程度非常高，严重影响家禽生长发育并造成环境污染。阿德呋啉属核苷酸类化合物，在国外已经有很多研究，属于一种新型的高效抗球虫药物，它通过干扰球虫的嘌呤代谢而发挥抗球虫作用，其抗球虫作用峰期为球虫的无性生殖期，即在球虫感染后1 ～ 3 d 作用最强。阿德呋啉是由是安徽农业大学药理学实验室和南京农业大学药理学实验室共同研发的新一代抗球虫药物，具有抗球虫谱广、高效、低毒等优点，对柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫都有效。近年来，由于家禽养殖规模的不断扩大，全国范围内球虫病的频繁爆发致使各种抗球虫药大量使用。另外，有些养殖户为了经济利益，不合理使用抗球虫药且不遵照休药期规定。由于阿德呋啉在鸡体内代谢主要以原药形式存在，并以原药形式排泄，因此造成该药在鸡肉组织中的残留及对环境的污染。如果人体经常摄入低剂量的同样残留物，会导致体内耐药性细菌的增加及对临床上治疗感染性疾病造成困难；同时，由于残留物在体内蓄积，导致各种器官病变，甚至癌变，这将对我国动物产品质量安全和消费者健康造成严重威胁。国内尚没有鸡肉中阿德呋啉残留检测的相关报道，因此，有必要建立一种鸡肉组织中阿德呋啉残留的检测技术。

现有技术对于阿德呋啉的检测主要是高效液相色谱-串联质谱法、高效液相色谱法等检测方法，但这些技术的缺陷明显：设备昂贵、操作复杂、难以推广。所以，建立一种简单、有效、适合基层使用的测定方法是极其必要的。本发明的目的是研制一种更适合企业进行现场检测且快捷简便、成本低廉的定性检测方法。

发明内容

针对以上情况，本发明的目的就是为了克服现有技术存在的缺陷而提供一种阿德呋啉的免疫胶体金检测卡及其制备方法，可有效解决能快速、简便地检测出β-肾上腺素受体激动剂阿德呋啉的问题。

本发明的阿德呋啉胶体金检测卡，包括包被了单克隆抗体胶体金标记物的胶体金结合垫、包被了阿德呋啉-BSA和羊抗鼠IgG的硝酸纤维素膜、样品垫、吸水垫、PVC胶板和塑料模具组成，在PVC胶板的一端依次粘附样品垫、结合垫，中间黏贴硝酸纤维素膜，另一端粘附吸水垫。

本发明的阿德呋啉胶体金检测卡的制备方法，是由以下步骤实现：

(1)胶体金溶液制备：取1 L 三角烧瓶1个，加入超纯水495 mL，而后加入1%氯金酸(HAuCl₄·3H₂O) 5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入1%柠檬酸三钠(Na₃C₆H₅O₇·2H₂O)溶液5-7 mL，继续搅拌加热，当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时，维持5 min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2-8℃保存备用；

(2)抗体的预处理：将要标记的阿德呋啉抗体在1000 r/min, 4℃条件下，离心20 min，取上清，用0.01 mol/L PBS稀释成1 mg/mL；或者用0.01 mol/L PBS稀释成1 mg/ml，过0.22µm滤膜；