[发明专利]高亲和力抗人和肽素的单克隆抗体及其制备方法与应用在审
| 申请号： | 201811587898.1 | 申请日： | 2018-12-25 |
| 公开（公告）号： | CN109679924A | 公开（公告）日： | 2019-04-26 |
| 发明（设计）人： | 王羽;吴培钿;何小维;康业;黄幼珍 | 申请（专利权）人： | 广州万孚生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/20 | 分类号： | C12N5/20;C07K16/26;G01N33/68;G01N33/577 |
| 代理公司： | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人： | 黄菲 |
| 地址： | 510663 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 高亲和力 抗体 肽素 制备 单克隆抗体 应用 免疫调节分子 抗体亲和力 抗原分子 免疫动物 免疫检测 细胞因子 递送 成熟 | ||
1.一种分泌抗人和肽素单克隆抗体的杂交瘤细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
以人和肽素抗原免疫小鼠；
向免疫后的小鼠递送表达细胞因子的质粒；
收集经质粒递送免疫的小鼠的脾细胞或淋巴结细胞，并将所述脾细胞或淋巴结细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合得到杂交瘤细胞，即得。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述人和肽素抗原为含有氨基酸序列SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的多肽。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述人和肽素抗原为偶联有大分子蛋白的人和肽素抗原，所述大分子蛋白为KLH、OVA、BSA中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述细胞因子包括mFlt3l、mGM-CSF和mCCL20。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述质粒的载体为pCAGGS。
6.根据权利要求1～5任一项所述的制备方法，其特征在于，所述的免疫小鼠为多次免疫，每次免疫后的第6～8天进行一次向小鼠递送表达细胞因子的质粒，每次免疫间隔时间为13～15天；和/或
所述的免疫小鼠包括：
初次免疫：将抗原与福氏完全佐剂等体积混合，充分乳化后，按照每只90～110μg进行小鼠背部皮下多位点注射；
第二次免疫：将抗原与福氏不完全佐剂等体积混合，充分乳化后，按照每只45～55μg进行小鼠背部皮下多位点注射；
其中每次免疫后向小鼠递送表达细胞因子的质粒。
7.一种分泌抗人和肽素单克隆抗体的杂交瘤细胞，其特征在于，由权利要求1～5任一项所述的制备方法制备得到。
8.一种抗人和肽素单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
取权利要求1～6任一项所述的分泌抗人和肽素单克隆抗体的杂交瘤细胞的制备方法制备得到的杂交瘤细胞，培养，分泌单克隆抗体，即得。
9.一种抗人和肽素单克隆抗体，其特征在于，由权利要求7所述的杂交瘤细胞分泌得到；或由权利要求8所述的抗人和肽素单克隆抗体的制备方法制备得到。
10.如权利要求9所述的抗人和肽素单克隆抗体在制备检测人和肽素的试剂盒中的应用。
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