[发明专利]含有亚种H.5-28菌种的细菌培养物的培养方法及其应用

说明书

本发明属于微生物技术领域，本发明在原有分离出来的草螺菌的基础上，对其进行详细的鉴定分析，对其进行了更详细的分类，得到Herspirillum huttitense5‑28，简称亚种H.5‑28；同时，具体提供了亚种H.5‑28菌种的快速大量培养方法，包括菌种活化、种子液的制备、发酵培养的具体培养过程，其中，所述发酵培养的培养条件为：液体培养基，接种量3％，28‑37℃，180r/min，培养时间48h；还提供了以该菌种为主要活性物质制备出的生物菌肥和该生物菌肥的制备方法；以及利用该生物菌肥在抵抗玉米青枯病、小麦纹枯病、附子根腐病多种病原菌害中的应用。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种含有亚种H.5-28菌种的细菌培养物的培养方法及其应用。

背景技术

植物生长促进菌(PGPB，Plant Growth Promoting Bacterium)可以促进宿主植物生长发育，减少胁迫，提高抗逆性，增强宿主植物适应能力。施用植物促生菌及相关生物菌肥，是当前生态农业的首选。已报道的植物促生菌主要为假单胞菌属(Pseudomonas)、固氮螺菌属(Azospirilum)、克雷伯菌属(Klebsiella)、草螺菌属(Herbaspirillum)等菌株。

草螺菌(Herbaspirillum sp.)是一类嗜用有机酸、耐性强、微需氧、略呈弯曲的革兰氏阴性非发酵杆菌，可在高糖培养基上生长但不利用蔗糖的细菌类群。草螺菌(Herbapirillumsp.)隶属变形杆菌门(Proteobacteria)、β-变形菌纲(Betaproteobacteria)、伯克霍尔德氏目(Burkholderiale)、草酸杆菌科(Oxalobacteraceae)、草螺菌属(Herbaspirillum)，大多分布在植物的根部或者茎干。1982年首次报道了草螺菌属的第一个种H.seropedicae。截至2017年底，已报到该属十多种。这些Herbaspirillum属细菌功能各异。如H.aquaticum是人体致病菌，H.chlorophenolicum可以降解环境中的4-氯酚，而H.frisingense和H.seropedicae可以促进植物生长，其促生机制包括固氮、溶磷、和提高植物乙烯合成。H.rubrisubalbicans既可以降解环境中的污染物，也可引起水稻的病害。Herbapirillum属中，即使是同种菌，不同的菌株生物学特性也相差很大。如H.seropedicae菌株Os45能引起水稻根系病害，菌株RAM4能降低蚕豆根系干重，而菌株Z-152却能显著提高玉米的抗旱性。总体来说Herbaspirillum属的不同菌种特性各异，其中能够促进植物生长和降解环境污染物的菌种具有很好应用开发前景。

Herbaspirillum huttitense5-28(以下简称亚种H.5-28)(CCTCC NO：M 2017149)是在中药材附子体内分离得到的根系促生菌，研究表明其具有促进植物生长、提高植物抗病性的作用。LysobacteryanansisSNNU513(CGMCC No.8375，ATCCBAA-2621)(以下简称SNNU513)是在中药材远志根系分离获得的一株细菌，该细菌能定殖于植物体内，通过分泌抗菌蛋白质拮抗诸多病原菌。枯草芽孢杆菌是目前常用的一类生防菌。

发明内容

本发明的第一个目的是提供该亚种H.5-28菌种大量培养方法。

本发明的第二个目的是提供该亚种H.5-28菌种或以该菌种为主要活性成分所制备出来的生物菌肥在抗玉米青枯病、小麦纹枯病、附子根腐病中的新的应用。