[发明专利]植烟土壤中化感物质的提取方法及检测方法

说明书

本发明涉及植烟土壤中化感物质的提取方法及检测方法，该方法对植烟土壤中的化感物质进行提取，并按照碱性、中性及酸性组分进行分离，浓缩后采用气质联用仪进行测定。本发明所述方法具有对植烟土壤化感物质提取专属性好、提取效率高、操作简单、检测快速灵敏等优点。

技术领域

本发明属于植烟土壤分析技术领域，具体涉及植烟土壤中化感物质的提取方法及检测方法。

背景技术

在我国，受耕地资源和水利条件制约，烟田连作现象非常普遍。然而，烟草作为一种忌连作作物，常常会表现出连作障碍，比如：烟叶病虫害增多、产质量下降等。许多研究表明烟草连作障碍与化感自毒作用密切相关，植株根系分泌的化感物质可以通过影响细胞膜透性、酶活性、离子吸收、水分吸收、光合作用、蛋白质和DNA合成等来影响烟株生长。因此，建立一种准确测定植烟土壤中的化感物质的方法，对探讨引起烟草连作障碍的物质因素，阐明和解决烟草连作障碍具有重要意义。

关于植烟土壤化感物质的提取及检测方法，目前相关研究及报道较少，吴文祥、陈冬梅等进行了烤烟根际土壤化感潜力评价及其自毒物质的GC-MS鉴定，但其仅对乙酸乙酯浸提的烤烟根际土壤酸性和碱性物质进行分离鉴定，且未对乙酸乙酯相提取物进行进一步分离，定量采用峰面积比进行，仅能确定各物质的相对含量。付建国等对轮作与连作烟田根际土壤酸性有机组分的初步分离与鉴定，但并未真正明确连作植烟土壤中哪些组分为化感物质，且对各物质定量采用面积归一法，测定的为相对含量，未指明哪些物质是真正具有化感自毒作用的物质，并未开发针对性的检测方法。

可见，为实现合理轮作，亟需建立一种能对植烟土壤中化感物质进行全面检测和合理定量分析的新方法。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种植烟土壤中化感物质的提取方法及检测方法，其具有对植烟土壤化感物质提取专属性好、提取效率高、操作简单、检测快速灵敏等优点。

本发明可被提取并检测的化感物质包括邻苯二酚、邻苯二甲酸、对羟基苯甲酸、丁醇、苯甲酸、3-甲氧基-4-羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛、3-甲氧基-4-羟基苯甲醛、邻苯二甲酸二异丁酯、邻,对二叔丁基苯酚、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二异辛酯和对苯二甲酸；

所述提取方法为：(1)向土壤样品中加入甲醇/水混合液，震荡后离心取上清液，将上清液浓缩，并向其中加入盐酸调节至pH＝3.0，然后用乙酸乙酯萃取，分液所得有机相为提取液a、水相为提取液b；(2)将所述提取液b用氢氧化钠溶液调节至pH＝10.0，再用乙酸乙酯萃取，分液所得有机相为含有碱性化感物质的提取液B；(2)将所述提取液a用氢氧化钠溶液洗，得到含有中性化感物质的提取液N；(3)收集(2)中的水相，用盐酸调节至pH＝3.0，然后用乙酸乙酯萃取，分液所得有机相为含有酸性化感物质的提取液A；(4)将所述提取液B和提取液N均浓缩至1mL，得到待测液B和待测液N；所述提取液A浓缩至1mL后进行硅烷化处理，得到待测液A；

所述检测方法为：采用GC-MS分别对所述待测液B、所述待测液N和所述待测液A进行检测，并通过外标法确定化感物质的含量；所述GC-MS的色谱条件如下：

色谱柱：HP-5MS，30m x 0.25mm x 0.25μm；

载气流量：1mL/min；

进样口温度：230℃；

分流比：5:1；

进样量：1μL；

升温程序：40℃保持2min，然后以5℃/min升温至220℃保持10min，再以10℃/min升温至280℃保持3min。

进一步地，甲醇与水的体积比为2:1至5:1。

进一步地，每克土壤样品所需甲醇/水混合液不少于6mL。