[发明专利]三七SSR多态性引物、多态性检测方法及SSR标记在总皂苷含量确定上的应用

说明书

本发明涉及分子技术领域，具体涉及三七SSR多态性引物、多态性检测方法及SSR标记在总皂苷含量确定上的应用，三七SSR多态性引物，由序列表中SEQ ID NO.1‑32所示引物组成；利用该引物进行PCR扩增对三七的多态性进行检测。本发明还提供了三七SSR标记在总皂苷含量确定上的用途。三七总皂苷与位点SSR35有关联。三七总皂苷与位点SSR2‑57有关联。本发明提供了三七多态性检测的方法及引物，对三七品种表型的研究和品种鉴定提供了有利的技术支持，对SSR标记与总皂苷的关联性研究，有利于高总皂苷含量三七品种选育的工作开展。

技术领域

本发明涉及分子技术领域，具体涉及三七SSR多态性引物、多态性检测方法及SSR标记在总皂苷含量确定上的应用。

背景技术

三七(Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen)是五加科(Araliaceae)人参属(Panax)多年生草本植物，分布于中国西南地区。三七的主要成分有三七总皂苷(PNS)、三七素(三七氨基酸)、黄酮、挥发油、氨基酸、糖类等，具有止血、保护心肌细胞、保护脑组织、降血脂、抗血栓、增强免疫力、抗炎、抗纤维化、抗肿瘤、消除氧自由基、抗氧化等药理作用。三七纺锤根是著名的跌打损伤特效药，止血散瘀、定痛消肿的功效良好，叶、果及根状茎也可入药，是“云南白药”和“片仔癀”的有效成分之一。

三七主要分布于我国北回归线附近的云南、广西的高海拔地区。云南东南部的文山及其周边地区是三七主产区和道地产区，种质面积和产量占全国98％。到目前三七已有400多年的栽培历史，但三七种质混杂现象仍然存在。加之三七生态适应能力弱、地理分布区域狭窄、生长周漫长、繁殖系数低、种子寿命短以及种植过程中，频繁的使用农药和化肥导致三七产生连作障碍，可种植三七的土地面积逐渐减少，原因主要是由于目前对三七遗传多样性了解还不够，遗传资源的利用缺乏理论指导；对形态类型的遗传背景不清楚，不能有针对的进行新品种选育。开发分子标记将为三七种质资源的利用和遗传改良提供依据。

三七分子标记研究：

目前国内外对三七的研究主要集中在化学成分、皂苷含量变、药理药效、三七对重金属敏感性以及连作体系中土壤细菌和真菌群落动态与三七死亡率的相关性。随着DNA分子标记技术快速发展，SNP、RAPD、AFLP及EST-SSR等标记相继用于人参属植物中。

Hongmei Luo等利用二代测序技术从三七的根部获得大量EST数据，找到与三萜皂苷生物合成相关酶编码序列的SSR标记。董林林等对三七抗病群体的SNP位点进行检测，发现record_519688位点与三七抗病性相关，并对三七群体潜在的抗病性进行系统选育，选育了首个三七抗病新品种苗乡抗七1号；李翠婷等通过对野三七转录组数据进行分析，发现野三七的转录组中存在大量SSR位点，为野三七的遗传多样性分析、遗传图谱构建提供了丰富的候选分子标记；杨云等利用ISSR、SRAP两种分子标记，对集团选择四代后的3个改良群体和自然群进行一致性、稳定性和特异性鉴定与评价。结果表明，集团选择的3个群体一致性均大于自然群体；刘丽等利用RAPD技术对人参、西洋参以及三七的亲缘关系进行评价，结果表明人参和西洋参亲缘关系较近，和三七的亲缘关系相对较远；张金渝等利用EST-SSR标记，以4个不同栽培居群通过3代集团选育的17份外观形状基本一致的选育品系为材料，以屏边三七为对照分析群体间遗传多样性，结果显示，17份选育品系材料和屏边三七被划分为4大类群，其中17份三七选育品系被分为3个类群，屏边三七单独聚为1个类群。

三七遗传多样性分析：

遗传多样性是指生物所携带的遗传信息的总和。广义上是指种内或种间在分子、细胞、个体水平上的遗传变异；狭义上指种内不同群体以及同一群体不同个体间的遗传多态性程度。

从1987年云南省文山州三七研究所建立屏边三七、姜状三七、竹节参、人参、西洋参、峨眉三七、狭叶竹节参等人参属植物种质资源圃以来，三七在栽培育种、生物学、化学成分、病虫害防治以及GAP种植等方面已经进行了细致研究，但对其遗传结构和遗传多样性的研究还不够，没有进行系统全面的分析。