[发明专利]一种人凝血酶原复合物中间产品液态保存的方法

权利要求书

1.一种人凝血酶原复合物中间产品液态保存的方法，其特征在于，具体步骤为：

（1）血浆吸附

使用已平衡的DEAE Sephadex A-50凝胶搅拌吸附已去除冷沉淀的血浆；

（2）凝胶洗涤

使用洗涤液洗涤上一步收集的凝胶，去除非人凝血酶原复合物（PCC）蛋白成分，洗涤液排空，不收集；

（3）凝胶洗脱，收集洗脱液

将步骤（2）洗涤结束的凝胶使用洗脱液进行洗脱，收集洗脱液于已清洁的超滤罐中；

（4）洗脱液的超滤

将步骤（3）获得的洗脱液浓缩，获得浓缩液；当中间产品的缓冲液中氯化钠浓度≥0.3mol/L时，不超滤；

（5）中间产品的保存

将浓缩液在中间产品非冻结状态下进行密封、保存；

（6）检测：FIX活性检测，根据《中国药典》2015年版三部人凝血因子Ⅸ效价测定法检测Ⅸ活性。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，平衡DEAE Sephadex A-50凝胶的平衡液中氯化钠的浓度为0.06-0.20mol/L，枸橼酸钠的浓度为0.01-0.03mol/L。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，搅拌吸附已去除冷沉淀的血浆时搅拌速度为10-50r/min。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，搅拌吸附已去除冷沉淀的血浆时搅拌速度为15-30r/min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，吸附条件为：pH 7.2±0.3，时间30-60min。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，pH为7.2±0.1。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，凝胶与血浆比例为每1kg血浆使用1-1.8g凝胶。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，凝胶用量为每1kg血浆使用1-1.5g凝胶。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，洗涤液中氯化钠浓度为0.15-0.25mol/L，枸橼酸钠浓度为0.01-0.02mol/L；洗涤次数为1-3次。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，洗涤液中氯化钠浓度为0.16-0.18mol/L。

11.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，洗涤次数为2次。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）中，洗脱液中氯化钠的浓度≥0.5mol/L，枸橼酸钠的浓度为0.02-0.03mol/L；洗脱次数为2-4次。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）中，洗脱次数为3次。

14.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）中：超滤使用的缓冲液中氯化钠的浓度≥0.3mol/L；超滤过程温度≤25℃。

15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）中：超滤过程温度为2-15℃。

16.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（5）中：保存的温度为0-15℃。