[发明专利]检测食源性致病菌的方法、用于SERS法检测食源性致病菌的试剂及其制备方法

说明书

本公开涉及一种检测食源性致病菌的方法、用于SERS法检测食源性致病菌的试剂及其制备方法。该检测食源性致病菌的方法包括以下步骤：S1、将十六烷基三甲溴化铵溶液、氯金酸溶液和硼氢化钠溶液混合后进行第一反应；S2、将第一混合液与十六烷基三甲溴化铵溶液、氯金酸溶液、硝酸银溶液和抗坏血酸溶液混合后进行第二反应；S3、将第三混合液与适配体DNA溶液、罗丹明溶液、羟胺盐酸盐溶液和氯金酸溶液混合后进行第三反应；S4、将含有纳米磁球的液体与适配体DNA溶液混合；S5、将拉曼探针溶液、第四混合液和待检测溶液混合后进行测试反应；S6、将食源性致病菌检测混合液进行SERS检测。该方法能够灵敏、准确且快速地检测出待测溶液中是否含有食源性致病菌。

技术领域

本公开涉及致病菌检测技术，具体地，涉及一种检测食源性致病菌的方法、用于SERS法检测食源性致病菌的试剂及其制备方法。

背景技术

食源性致病菌是引起食源性疾病的首要原因，对人类健康造成很大危害，是食品安全的重大隐患。而且当前致病菌污染日趋严重，在医药、食品、环境等方面已经引起人们高度的重视。大肠杆菌、沙门氏菌、副溶血弧菌是种主要的致病菌，可以引起肠胃炎，伤寒、霍乱，猩红热，菌痢等疾病，可能危及人类生命。目前对致病菌的检测已做出了很大的努力，主要包括传统的微生物检验技术、分子生物学技术、仪器分析技术和免疫学技术法等，现有的这些分析方法虽各有优势，但在一定的局限性，或者前处理步骤复杂、时间长，或者仪器设备庞大昂贵、缺乏更高的灵敏度，受环境因素影响变化较大，不能对微生物进行灵敏快速分析等，建立一种高效灵敏地检测方法的体系是目前迫切需要的。

由于致病菌可以特异性的结合适配体形成很强很稳定的结构，近些年大量的基于适配体的致病菌检测方法被大量的发明。但这些传感方法存在操作繁琐，耗时长，选择性差等缺点。如何快速、简单地检测致病菌的技术问题亟待解决。

发明内容

本公开的一个目的是提供一种基于适配体DNA调控的金纳米棒的生长成SERS探针并用于检测食源性致病菌的方法，通过该方法能够灵敏、准确且快速地检测出待测溶液中是否含有食源性致病菌。

本公开的另一个目的是提供一种用于SERS法检测食源性致病菌的试剂及其制备方法。

为了实现上述目的，本公开第一方面：提供一种检测食源性致病菌的方法，该方法包括以下步骤：

S1、将十六烷基三甲溴化铵溶液、氯金酸溶液和硼氢化钠溶液混合后进行第一反应，得到第一混合液；

S2、将步骤S1得到的所述第一混合液与含有十六烷基三甲溴化铵溶液、氯金酸溶液、硝酸银溶液和抗坏血酸溶液的第二混合液混合后进行第二反应，收集固体产物；将所述固体产物与水混合，得到第三混合液；

S3、将步骤S2得到的所述第三混合液与适配体DNA溶液、罗丹明溶液、羟胺盐酸盐溶液和氯金酸溶液混合后进行第三反应，得到用于检测食源性致病菌的拉曼探针溶液；

S4、将含有纳米磁球的液体与所述适配体DNA溶液混合，得到第四混合液；

S5、将步骤S3得到的所述用于检测食源性致病菌的拉曼探针溶液、步骤S4得到的所述第四混合液和待检测溶液混合后进行测试反应，磁分离后得到食源性致病菌检测混合液；

S6、将步骤S5得到的所述食源性致病菌检测混合液进行SERS检测。

可选地，步骤S1中，所述十六烷基三甲溴化铵溶液、氯金酸溶液和硼氢化钠溶液的摩尔比为1000：(1-10)：(3-12)；

所述第一反应的条件为：温度为25-30℃，时间为1-3h；和/或，

步骤S2中，所述十六烷基三甲溴化铵溶液、氯金酸溶液、硝酸银溶液和抗坏血酸溶液的摩尔比为1000：(1-25)：(0.1-2.4)：(1-14)；