[发明专利]一种观察花芽分化过程的石蜡切片的制作方法

权利要求书

1.一种观察花芽分化过程的石蜡切片制作方法，其特征在于，包括植物样本取材固定、脱水透明、透蜡包埋、蜡块修正切片、粘片展片、染色封固；

其中，所述植物样本取材固定包括切取植物茎尖中心组织，所述切取植物茎尖中心组织包括以茎尖中心点及叶片的基生线为轴，在平行于叶片基生线方向切取宽度为4-6mm，在垂直于叶片基生线方向切取宽度为2-4mm，在高度方向切取5-7mm。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述植物样本取材固定包括：剖离基生在植物根状茎上的叶片后，切取植物茎尖中心组织，浸于装有FPA固定液的容器中，并将所述容器置于真空干燥器内，使样品沉底，得到固定样本。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述脱水透明包括：将所述固定样本中的液体倒出后，向其中置换不同梯度的脱水机和透明剂进行脱水透明。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述透蜡包埋包括：将脱水透明后得到的材料进行预处理后，进行包埋，所述预处理包括将所述脱水透明后得到的材料依次放入体积比为1:6的石蜡和叔丁醇混合液、体积比为3:8的石蜡和叔丁醇混合液、熔化的纯石蜡A、熔化的纯石蜡B、熔化的纯石蜡C。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述置换不同梯度的脱水机和透明剂进行脱水透明包括：50％乙醇浸泡处理、60％乙醇浸泡处理、70％乙醇浸泡处理、体积比为13:7的75％乙醇和叔丁醇混合液浸泡处理、体积比为9:11的85％乙醇叔丁醇混合液浸泡处理、体积比为1:3的95％乙醇叔丁醇混合液浸泡处理、纯叔丁醇A浸泡处理、纯叔丁醇B浸泡处理。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述50％乙醇浸泡处理、60％乙醇浸泡处理、70％乙醇浸泡处理、体积比为13:7的75％乙醇和叔丁醇混合液浸泡处理、体积比为9:11的85％乙醇叔丁醇混合液浸泡处理、体积比为1:3的95％乙醇叔丁醇混合液浸泡处理的处理时间均为20分钟；所述纯叔丁醇A浸泡处理、纯叔丁醇B浸泡处理的处理时间均为1小时。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述置换不同梯度的脱水机和透明剂进行脱水透明在摇床中进行，摇床温度为25℃，转速为100r/h。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述粘片展片包括：将蜡片用明胶粘贴剂粘在载玻片上，置于展片台上加热至完全伸展，展片台温度设定为42℃。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述染色封固包括：依次采用二甲苯、体积比为1:2的无水乙醇和二甲苯混合液、体积比为1:1的无水乙醇和二甲苯混合液、无水乙醇、95％乙醇、90％乙醇、80％乙醇、70％乙醇、60％乙醇分别浸泡；

采用1％苯胺番红染液暗环境染色3-5小时后，依次采用60％乙醇、70％乙醇、80％乙醇、90％乙醇、95％乙醇浸泡20-30秒；

采用0.5％苯胺固绿染液染色后，依次采用95％乙醇、无水乙醇、体积比为1:1的无水乙醇和二甲苯混合液、纯二甲苯进行浸泡处理；

采用二甲苯稀释的加拿大树胶作为封固剂，盖上盖玻片封固。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述1％苯胺番红染液的溶剂为50％乙醇溶液；

所述0.5％苯胺固绿染液的溶剂为95％乙醇溶液，染色时间为30秒；

采用0.5％苯胺固绿染液染色后，所述95％乙醇的处理时间为3-5秒，所述无水乙醇、体积比为1:1的无水乙醇和二甲苯混合液的处理时间均为20-30秒，所述纯二甲苯的处理时间为2分钟。