[发明专利]一种单细胞基因组目标区域捕获的方法有效
| 申请号： | 201811596459.7 | 申请日： | 2018-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN109957615B | 公开（公告）日： | 2023-07-21 |
| 发明（设计）人： | 洪燕;惠峰;玄兆伶;李大为;梁峻彬;陈重建 | 申请（专利权）人： | 北京安诺优达医学检验实验室有限公司;安诺优达基因科技（北京）有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100176 北京市大兴区经济技术开*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 单细胞 基因组 目标 区域 捕获 方法 | ||
1.一种单细胞基因组目标区域捕获的方法，包括：
步骤A：采用多重置换扩增方法对单细胞基因组进行等温扩增，获得扩增后的基因组；
步骤B：取3μg扩增后的基因组进行打断，获得片段化的DNA片段；
步骤C：将片段化的DNA片段进行末端修复，获得平末端DNA片段；
步骤D：将平末端DNA片段进行3'端加A，获得3'端加A的DNA片段；
步骤E：将3'端加A的DNA片段进行加接头，获得加接头的DNA片段；
步骤F：将加接头的DNA片段进行PCR扩增，获得扩增的DNA片段；
步骤G：将扩增的DNA片段进行目标区域捕获，获得捕获的DNA片段；
步骤H：将捕获的DNA片段进行PCR扩增，获得PCR扩增产物；
步骤I：将PCR扩增产物进行测序；
其中，所述步骤A中等温扩增的条件为30℃反应2小时；
所述步骤A之后还包括：
步骤A-1：使用核苷酸序列如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:44所示的引物对扩增后的基因组进行PCR扩增；
所述步骤F中PCR扩增的循环数为4～6个循环；
所述步骤G中目标区域捕获的条件为65℃反应16～24小时。
2.根据权利要求1任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤F中加接头的DNA片段的量为100～250ng。
3.根据权利要求1任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤F中加接头的DNA片段的量为150～200ng。
4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤F中PCR扩增的循环数为5个循环。
5.根据权利要求1～4任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤G中目标区域捕获的条件为65℃反应24小时。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤B与步骤C之间、步骤C与步骤D之间、步骤D与步骤E之间、步骤E与步骤F之间、步骤F与步骤G之间、步骤G与步骤H之间、步骤H与步骤I之间，和/或在步骤I之后包括对DNA片段进行纯化的步骤。
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