[发明专利]一种检测盐酸克伦特罗含量的非竞争法酶联免疫分析方法

说明书

本发明公开了一种检测盐酸克伦特罗含量的非竞争法酶联免疫分析方法，分别调制抗体的轻链可变区或轻链可变区与其他蛋白的融合蛋白质、重链可变区或重链可变区与噬菌体的融合体、或重链可变区与酶的融合蛋白，利用抗体的轻链可变区和重链可变区同时作用盐酸克伦特罗形成稳定复合体的原理，对盐酸克伦特罗进行检测；本发明检测盐酸克伦特罗含量的非竞争法酶联免疫分析方法，不需要在酶标板上包被盐酸克伦特罗与牛血清蛋白的偶联物或制备盐酸克仑特罗与酶的偶联物，大大降低了检测成本，具有检测速度快，灵敏度高，准确度高，易于实施，检测成本低等优点。

技术领域

本发明涉及检测盐酸克伦特罗含量技术领域，具体说是一种检测盐酸克伦特罗含量的非竞争法酶联免疫分析方法。

背景技术

盐酸克伦特罗是一种β2受体激动剂，属于拟肾上腺素类药物，能够改善动物体内的代谢途径，促进肌肉特别是骨骼肌中蛋白质的合成，抑制脂肪的合成，从而加快生长速度，但是盐酸克伦特罗摄入过量会引起巨大的不良反应，严重者发生急性中毒、甲亢，甚至心律失调等，因此盐酸克伦特罗的含量需要进行检测，液相色谱法、气相色谱法是常规的检测盐酸克伦特罗含量的检测方法，但是，这类检测方法需要昂贵的设备，很难普及使用，本领域人员为了降低检测成本，采用免疫测定法检测盐酸克伦特罗的含量，在免疫测定方法的开发中，竞争法酶联免疫分析技术是目前比较常用的方法。

竞争法酶联免疫分析技术检测盐酸克伦特罗含量包括盐酸克伦特罗和酶标盐酸克伦特罗竞争与固相抗体结合，因此结合于固相的酶标盐酸克伦特罗的量与受检样品中盐酸克伦特罗的量呈反比，其操作步骤包括：(1)将特异抗体与固相载体连接，形成固相抗体，洗涤。(2)待测管中加受检标本和一定量酶标盐酸克伦特罗的混合溶液，使之与固相抗体反应，如受检标本中无盐酸克伦特罗，则酶标盐酸克伦特罗能顺利地与固相抗体结合；如受检标本中含有盐酸克伦特罗，则与酶标盐酸克伦特罗以同样的机会与固相抗体结合，竞争性地占去了酶标盐酸克伦特罗与固相抗体结合的机会，使酶标盐酸克伦特罗与固相抗体的结合量减少；参考管中只加酶标盐酸克伦特罗，保温后，酶标盐酸克伦特罗与固相抗体的结合可达最充分的量，洗涤。(3)加底物显色：参考管中由于结合的酶标克伦特罗最多，故颜色最深。参考管颜色深度与待测管颜色深度之差，代表受检标本中盐酸克伦特罗的量，待测管颜色越淡，表示标本中盐酸克伦特罗的含量越多。抗原抗体的线性关系来最终确定体系的最终检测目标的浓度。

竞争法酶联免疫分析技术虽然比使用大型仪器的分析方法简便，但是仍然具有较多的操作步骤，由于其原理是利用两种形式的同种抗原(小分子抗原和其与大分子物质连接的小分子抗原)竞争性的与抗体结合，并且其灵敏度和检测范围受抗体亲和力的影响较大，并且检测范围通常在数十至几千ng/ml，检测的浓度范围窄。

竞争法酶联免疫分析技术对盐酸克伦特罗进行检测时，也可在酶标板上包被盐酸克伦特罗与牛血清蛋白的偶联物BSA-CLEN，然后使标本中的游离盐酸克伦特罗与包被的偶联物竞争性地与抗盐酸克伦特罗抗体结合，最后通过测定跟包被偶联物结合的抗体的量来计算标本中盐酸克伦特罗的含量。不管基于以上哪一种检测形式，制备盐酸克伦特罗与酶的偶联物或BSA-CLEN，都需要很高的成本，从而导致竞争法酶联免疫分析的成本也较高。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的是提供一种检测盐酸克伦特罗含量的非竞争法酶联免疫分析方法。

本发明为实现上述目的，通过以下技术方案实现：

一种检测盐酸克伦特罗含量的非竞争法酶联免疫分析方法，分别调制抗体的轻链可变区或轻链可变区与其他蛋白的融合蛋白质、重链可变区或重链可变区与噬菌体的融合体、或重链可变区与酶的融合蛋白，利用抗体的轻链可变区和重链可变区同时作用盐酸克伦特罗形成稳定复合体的原理，对盐酸克伦特罗进行检测；

其中重链可变区的氨基酸序列为：