[发明专利]多重引物组及利用该引物组基于高通量测序构建人类T细胞免疫组库的方法

权利要求书

1.一种多重引物组，其特征在于：由一组上游引物和一条下游引物组成，所述上游引物由接头1、引物条码1、测序引物1、针对可变区V区设计的特异性引物V1-V24串联而成；所述下游引物由接头2、引物条码2、测序引物2、针对恒定区C区设计的特异性引物Vc串联而成；引物条码1和引物条码2的序列不同；测序引物1与测序引物2序列相同。

2.如权利要求1所述的多重引物组，其特征在于：接头1序列为AAT GAT ACG GCG ACCACC GAG ATC TAC AC；接头2序列为CAA GCA GAA GAC GGC ATA CGA GAT。

3.如权利要求1所述的多重引物组，其特征在于：测序引物1与测序引物2的序列为GCTCTT CCG ATC T。

4.如权利要求1所述的多重引物组，其特征在于：引物条码1、引物条码2由6个或者8个核苷酸组成，不同样本的引物条码1、引物条码2间至少有一个核苷酸的差异。

5.如权利要求1所述的多重引物组，其特征在于，

上游引物中特异性引物V1-V24分别为：

V1：5′ CAA CAG TTC CRT GAC TMG CAC-3′

V2：5′- CAT ATG AGA WTG GAT TAG TCA TT-3′

V3：5′- TAC TTT AAY AAC AAC GCT CCG-3′

V4：5′- TCT CGA AAA KAG AAG ACG TAT-3′

V5：5′- GAG TCA GGA MTG CCA CAG GAA-3′

V6：5′- AGG CCT SAG GGA TCC AGC TC-3′

V7：5′- GAC AAA GGA GW A GTC AGA GAT-3′

V8：5′- ACA GTC TCC TCT ATA AGG ACG-3′

V9：5′-TCT AGA GAG TTC AAG GAG CGC-3′

V10：5′- GAT ATG AGA ATG AGG AYG CAG-3′

V11：5′- TCA ACC ARG CAA CGG TGA CCT-3′

V12：5′- TTC AGT GAG AYA CAG ARA AAC-3′

V13：5′- CTG AAT GCC AAT ACA GMT CTC-3′

V14：5′- GAC CAA CCT GAA GTC CMC AAT-3′

V15：5′- TCT GAG GTG GGG CAG AYT CTC-3′

V16：5′- CAC AGA AAG TAA AMG ATT TTC AG-3′

V17：5′- GAG TCT TTT CAG GAT GTG TCC-3′

V18：5′-TCA TTT CGT AAC ATG AAA AMA TGC-3′

V19：5′- AAA GAT TTT CAG AAT GAA YCA GAC-3′

V20：5′- GTC TCT CGAGCA GCA CAM GCT-3′

V21：5′- CAG AGA TCA CTG AAA GAT TCG A-3′

V22：5′- CCT AAC TAT AMC TCT GAG GTG-3′

V23：5′- AAA TCT GCA GAC AYA GAT CAC-3′

V24：5′- GTT GGT GAG RGT GCA ACT GCC-3′；

下游引物中特异性引物为：

Vc：5‘- GTGTCATGGGTTCACMTTYTTCAGGTGC -3'。