[发明专利]一种肠炎沙门氏菌检测方法、试纸条及应用

说明书

本发明公开了一种肠炎沙门氏菌检测方法、试纸条及应用，肠炎沙门氏菌的检测方法，包括将带正电的富氮碳纳米颗粒与待检测样品中的肠炎沙门氏菌进行孵育得到待检液，再通过肠炎沙门氏菌单克隆抗体捕获待检液中的与带正电的富氮碳纳米颗粒结合的肠炎沙门氏菌。该发明只用一种抗体划在硝酸纤维素膜上直接进行检测，打破了传统同时采用两种抗体的夹心检测方法，大大节省了成本，解决了配对抗体的困难，更简单，方便，新颖。

技术领域

本发明属生物检测领域，具体涉及一种肠炎沙门氏菌检测方法、试纸条及应用。

背景技术

沙门氏菌是一类革兰氏阴性，大部分周生鞭毛，可以运动，无荚膜和芽孢，两端钝圆的短杆菌，最适生长温度为37℃，20℃以上可以正常繁殖。沙门氏菌感染是公共卫生学中具有重要意义的人畜共患病之一，夏秋季节的食物传播是主要感染途径，人体摄入之后一般在12-14h内出现腹泻、发热、头痛、腹痛、恶心及呕吐和畏寒等症状，还伴有乏力、肌肉酸痛等症状，严重的可以造成死亡。其中以鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌和肠炎沙门氏菌最为常见。沙门氏菌是我国众多食品标准中的检测项目，且要求不得检出。快速、准确、灵敏、简便地检测出沙门氏菌，在医疗卫生、食品卫生、动物疫病监测等方面具有重要的意义。迄今为止，已经报道了检测沙门氏菌的几种可行方法，包括传统沙门氏菌检测方法，酶联免疫吸附测定，聚合酶链反应和电化学生物传感器。但是，这些方法不适合实时检测，因为它们需要依靠复杂而昂贵的仪器，复杂的样品预处理和操作，耗时费力。为了更早更灵敏地检测肠炎沙门氏菌，特别是对于定点护理应用，实现易于操作，快速，便携和低成本的方法仍然是巨大的技术挑战。

近年来，免疫层析试纸条，由于其制备和操作方便，成本低，一次性使用，检测时间短，结果直观可靠等优点，得到了广泛的关注，成为快速检测的成熟诊断工具。免疫层析试纸条是一类优异的生物传感器，在食源性致病菌检测领域得到广泛的应用。传统试纸条用胶体金作为探针，但是灵敏度低，这阻碍了其进一步的应用。为了满足需求，研究者从诸多方面致力于提高试纸条检测方法的灵敏度，例如通过使用不同的标签如荧光纳米微球，量子点，磁性微球，上转换纳米材料，石墨烯，复合材料等。虽然提高了灵敏度，但这些纳米材料的合成方法较复杂，合成条件较高。另外，在传统探针的构建过程中，会影响到抗体的活性，进而影响到免疫层析试纸条的广泛应用。因此，迫切需要不依赖于传统探针构建，稳定低成本的信号载体，以简化分析步骤，提高试纸条的实用性。

发明内容

针对现有技术中的缺陷和不足，本发明提供了一种肠炎沙门氏菌检测方法、试纸条及应用，打破传统的沙门氏菌的夹心检测方法，只用一种抗体划在硝酸纤维素膜上直接进行检测，只需将细菌和表面正电的富氮碳纳米颗粒进行简单的孵育就可得到明亮的黑色条带，而不使用任何纳传统探针的构建。

为达到上述技术效果，本发明采取的技术方案为：

根据本发明的第一个目的，一种肠炎沙门氏菌的检测方法，包括将带正电的富氮碳纳米颗粒与待检测样品中的肠炎沙门氏菌进行孵育得到待检液，再通过肠炎沙门氏菌单克隆抗体捕获待检液中的与带正电的富氮碳纳米颗粒结合的肠炎沙门氏菌。

可选的，所述的带正电的富氮碳纳米颗粒采用氮化碳纳米颗粒在高温下碳化得到富氮碳纳米颗粒；再将得到的富氮碳纳米颗粒经过高温强酸刻蚀给富氮碳纳米颗粒表面带有正电荷即得。

可选的，高温下碳化的温度为700～900℃；高温强酸刻蚀的温度为90～120℃；所述的强酸选自浓盐酸、浓硝酸或浓硫酸。

可选的，(1)制备富氮碳纳米颗粒：包括将尿素在高温下煅烧得到氮化碳纳米颗粒，氮化碳纳米颗粒在高温下碳化得到富氮碳纳米颗粒；

(2)制备表面正电的富氮碳纳米颗粒溶液：包括将得到的富氮碳纳米颗粒经过高温强酸刻蚀给富氮碳纳米颗粒表面带有正电荷即得；

尿素的高温煅烧温度为500～600℃，高温下碳化的温度为700～900℃；高温强酸刻蚀的温度为90～120℃；所述的强酸选自浓盐酸、浓硝酸或浓硫酸。