[发明专利]定点突变改造的赖氨酸合成途径关键酶基因AK2和DHPS1及其应用

权利要求书

1.定点突变改造的天冬氨酸激酶AK2及二氢毗考琳酸合成酶DHPS1，作用于水稻的赖氨酸合成途径，其特征在于，

所述定点突变改造的天冬氨酸激酶AK2的氨基酸序列如SEQ ID NO 4所示；所述定点突变改造的二氢毗考琳酸合成酶DHPS1的氨基酸序列如SEQ ID NO 8所示。

2.根据权利要求1所述的定点突变改造的天冬氨酸激酶AK2及二氢毗考琳酸合成酶DHPS1，其特征在于，所述定点突变改造的天冬氨酸激酶AK2是由氨基酸序列为SEQ ID NO 2所示的来源于Oryza sativa水稻的天冬氨酸激酶AK进行体外定点突变修饰得到的，其第449位氨基酸由丝氨酸变成了亮氨酸；

所述定点突变改造的二氢毗考琳酸合成酶DHPS1是由氨基酸序列为SEQ ID NO 6所示的来源于水稻的二氢毗考琳酸合成酶DHPS进行体外定点突变修饰得到的，其第124位氨基酸由丝氨酸变成了天冬酰胺。

3.权利要求1-2中任意一项权利要求所述的定点突变改造的天冬氨酸激酶AK2的编码基因及二氢毗考琳酸合成酶DHPS1的编码基因，其特征在于，所述定点突变改造的天冬氨酸激酶AK2的编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO 3所示；

所述定点突变改造的二氢毗考琳酸合成酶DHPS1的编码基因，其核苷酸序列SEQ ID NO7所示。

4.权利要求3所述定点突变改造的天冬氨酸激酶AK2的编码基因及二氢毗考琳酸合成酶DHPS1的编码基因在构建高赖氨酸转基因水稻中的应用。

5.一种重组质粒，包含权利要求3所述定点突变改造的天冬氨酸激酶AK2的编码基因及二氢毗考琳酸合成酶DHPS1的编码基因；且，所述重组质粒的构建方法是：将权利要求3所述的AK2和DHPS1的编码基因克隆到pSB130超双元表达载体上，利用组成型表达的CaMV 35S启动子驱动AK2和DHPS1基因，构建包含AK2和DHPS1基因重组质粒表达载体。

6.一种高赖氨酸转基因水稻的构建方法：通过农杆菌介导法或基因枪法将权利要求5所述的重组质粒导入水稻胚性愈伤组织中，经筛选、分化和生根获得高赖氨酸转基因水稻；通过聚合酶链式反应检测目的基因获得转基因阳性植株和阳性纯合系；通过荧光实时定量PCR方法检测修饰后的目的基因AK2和DHPS1在水稻中的表达水平，通过氨基酸分析验证改造后的AK2和DHPS1在水稻中的效应。