[发明专利]检测脂蛋白磷脂酶A2蛋白浓度的试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测脂蛋白磷脂酶A2蛋白浓度的试剂盒，包括校准品、清洗液、底物溶液、预处理液、酶结合物工作液和磁珠结合物工作液；该预处理液中含有表面活性剂，酶结合物工作液中含有酶标记的Lp‑PLA2抗体，磁珠结合物工作液中含有Lp‑PLA2抗体包被的磁珠。本发明将化学发光免疫分析法与磁性微粒分离技术相结合，检测灵敏度高、特异性强、结果准确，能实现50‑1000ng/ml的宽范围检测。直接使用手指末梢全血或抗凝静脉全血作为待检样品，无需预先对样本预处理，就可直接进行检测，大大提高了检测速度，简化了操作步骤，扩大了试剂盒的适用范围；可全自动、一键式操作，7分钟左右即可出检测结果，能很好的满足医院急诊和门诊快速诊断的需求，便于大范围推广应用。

技术领域

本发明涉及免疫化学检测技术，尤其是涉及一种检测脂蛋白磷脂酶A2（Lp-PLA2）蛋白浓度的试剂盒。

背景技术

脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)是磷脂酶A2(phospholipase A2，PLA2)超家族中的一员，由441个氨基酸残基组成，相对分子量为45.4kD。PLA2是一类能水解磷脂甘油支架Sn-2位上的短链酰基的酶族。根据存在的部位、底物特异性、辅助因子的需求和生理学作用等，PLA2主要分为分泌型(sPLA2)、胞质型(Cpla2)和非钙离子依赖型(iPLA2)三种。Lp-PLA2属于iPLA2不需要钙离子维持其催化活性，是丝氨酸依赖的磷脂酶，主要作用于氧化磷脂而不是在Sn-2带有长链脂肪酸的未氧化磷脂。Lp-PLA2主要由成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌，并受炎性介质的调节，人循环中的Lp-PLA2以与脂蛋白颗粒结合的形式存在，其中2／3与LDL结合，1／3与HDL、VLDL结合。Lp-PLA2作为一种新的炎性反应标志物，在动脉粥样硬化的几个主要阶段中均起作用。Lp-PLA2主要由巨噬细胞和淋巴细胞产生，在早期的关于Lp-PLA2与动脉粥样硬化的研究中因Lp-PLA2能水解致炎因子如血小板活化因子(plateletactivating Nctor，PAF)及结构相关的氧化磷脂，因此曾被认为能抑制炎性反应，甚至能抑制动脉粥样硬化的形成，故也称为血小板活化因子乙酰水解酶(platelet activatingNctor acetyl hydrolase，PAF-AH)。但是近年来研究已证实Lp-PLA2更大的作用在于促进动脉粥样硬化的发生与发展。Lp-PLA2主要结合于LDL，而LDL尤其是氧化LDL沉积于动脉壁是一个关键步骤。LDL氧化的早期结果之一就是氧化卵磷脂的快速降解，产生大的溶血卵磷脂(LYSO-PC)和游离氧化脂肪酸。这一反应产生的2个新脂质产物都是强有力的炎症介质，能引起单核细胞趋化性改变，引起内皮功能障碍，诱导表达内皮细胞黏附分子，增加表达血小板源生长因子和表皮生长因子类蛋白，从而导致慢性炎症的形成，加速动脉粥样硬化的进程。Lp-PLA2是唯一能水解氧化磷脂的酶，被运输到动脉壁与脂蛋白结合，因此，在从LDL氧化潴留到动脉粥样硬化损伤形成的一系列病理过程中，LDL相关的Lp-PLA2发挥了重要作用。Lp-PLA2基因A379V的等位基因纯合子导致Lp-PLA2活性下降，与冠心病危险下降相关。另外已经发现，在人和兔子的粥样硬化的主动脉中，Lp-PLA2：mRNA表达增加，兔血中的Lp-PLA2活性比对照组显著增加。用药物抑制Lp-PLA2：可以观察到遗传性高脂血症兔子的动脉粥样硬化斑块进展明显减慢，进一步证实了Lp-PLA2主要发挥促进动脉粥样硬化形成的作用。

目前Lp-PLA2测定的方法有活性法、化学发光法、层析法、ELISA法和放射免疫法等。常规应用活性法和ELISA法较多，但活性法仪器价格昂贵，ELISA法操作过程又复杂、检测时间且过长，均不利于实现Lp-PLA2的临床快速检测。

目前质量法试剂及检测样本和活性法试剂之间有较大差别，而且有权威文献报道称目前质量法试剂还不能完全真实的反应Lp-PLA2在人体内的真实浓度。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术中的Lp-PLA2质量法检测试剂盒不能真实反映Lp-PLA2真实浓度水平及受限于样本类型的检测局限性的缺陷，提供了一种能准确检测脂蛋白磷脂酶A2蛋白浓度的试剂盒。