[发明专利]一种表达IL-17A信号通路阻断剂的间充质干细胞有效
| 申请号： | 201811601477.X | 申请日： | 2018-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN109679920B | 公开（公告）日： | 2019-11-22 |
| 发明（设计）人： | 刘拥军;刘广洋;张晨亮;李欣;王皓;米一 | 申请（专利权）人： | 北京贝来生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;A61K35/28;A61P37/02 |
| 代理公司： | 11426 北京康思博达知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 刘冬梅<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 100176 北京市大兴*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 信号通路阻断剂 间充质干细胞 炎症部位 自身免疫性疾病 人体免疫细胞 修复 特异性阻断 靶向作用 基因修饰 机体炎症 损伤部位 特异表达 组织器官 靶向 介导 损伤 治疗 | ||
1. 一种表达IL-17A信号通路阻断剂的间充质干细胞，其特征在于所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞，包含编码IL-17A信号通路阻断剂的外源核酸序列，其中所述IL-17A信号通路阻断剂是IL-17A单链抗体与IgG4的重链Fc片段组成的融合蛋白；所述IL-17A单链抗体包含序列为SEQ ID NO：1的人IL-2信号肽、序列为SEQ ID NO：3的IL-17A抗体轻链可变区（VL）、序列为SEQ ID NO：5的接头和序列为SEQ ID NO：7的IL-17A抗体重链可变区（VH）四部分；所述IgG4的重链Fc片段包含序列分别为SEQ ID NO：9、11、13的人免疫球蛋白IgG4重链恒定区的CH3、CH2以及铰链区三部分。
2. 权利要求1所述的间充质干细胞，其中所述外源核酸序列中编码人IL-2信号肽、IL-17A抗体轻链可变区（VL）、接头和IL-17A抗体重链可变区（VH）四部分的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：2、4、6和8所示；所述外源核酸序列中编码人免疫球蛋白IgG4重链恒定区的CH3、CH2以及铰链区三部分的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：10、12和14所示。
3.权利要求1所述的间充质干细胞，其中所述外源核酸序列通过慢病毒载体导入所述间充质干细胞。
4.权利要求3所述的间充质干细胞，其中所述慢病毒载体是LV-EGFP慢病毒载体系统。
5.权利要求1-4任一项的间充质干细胞的制备方法，包括以下步骤：
（1）构建包含编码IL-17A信号通路阻断剂的外源核酸序列的慢病毒表达载体；
（2）将步骤（1）得到的慢病毒表达载体感染宿主细胞，包装得到成熟慢病毒；
（3）收获步骤（2）得到的成熟慢病毒，感染间充质干细胞，筛选感染成功的细胞。
6.权利要求5的制备方法，包括以下步骤：
（1）利用LV-EGFP慢病毒载体系统构建αIL17A:Fc融合蛋白的慢病毒表达质粒LV-αIL17A:Fc；其中，αIL17A:Fc是IL-17A单链抗体与IgG4的重链Fc片段组成的融合蛋白，αIL17A:Fc编码基因的3’-末端先后连接IRES序列和EGFP基因，形成αIL17A:Fc-I-EGFP序列，共同处于LV-EGFP慢病毒载体中CMV启动子的下游；
（2）将LV-αIL17A:Fc质粒与慢病毒框架质粒pGag/Pol、pRev、pVSV-G混合，通过LTX脂质体导入293T细胞，包装得到成熟慢病毒；
（3）收获步骤（2）的成熟慢病毒后感染间充质干细胞，24h后加入嘌呤霉素筛选感染成功的细胞。
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