[发明专利]一种人血浆中替格瑞洛及其活性代谢产物浓度的检测方法

权利要求书

1.一种人血浆中替格瑞洛及其活性代谢产物浓度的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）标准工作溶液的配制：精密称取替格瑞洛及其活性代谢产物AR-C124910XX，加入50v/v%乙腈溶液，配制成浓度为2000 μg/mL的替格瑞洛储备液及1000 μg/mL的AR-C124910XX储备液，将替格瑞洛储备液用50v/v%乙腈溶液稀释成梯度浓度为500、1000、2000、5000、7500、10000 ng/mL的替格瑞洛工作溶液，将AR-C124910XX储备液用50v/v%乙腈溶液稀释成梯度浓度为200、500、1000、2000、3000、5000 ng/mL的AR-C124910XX工作溶液；将替格瑞洛储备液用50v/v%乙腈溶液稀释成梯度浓度为800、3000、8000 ng/mL的替格瑞洛质控溶液，将AR-C124910XX储备液用50v/v%乙腈溶液稀释成梯度浓度为400、1500、4000ng/mL的AR-C124910XX质控溶液；精密称取伏立康唑，加入50v/v%乙腈溶液，配制成浓度为50 μg/mL的内标工作溶液；所有储备液及工作溶液在4℃下保存，备用；

取空白人正常血浆，分别加入所述的替格瑞洛工作溶液和AR-C124910XX工作溶液，混匀，配置成相应梯度的校正标样，替格瑞洛校正标样的梯度浓度范围为50～1000 ng/mL，AR-C124910XX校正标样的梯度浓度范围为20～500 ng/mL；取空白人正常血浆，分别加入所述的替格瑞洛质控溶液和AR-C124910XX质控溶液，混匀，配置成相应浓度的质控样品，替格瑞洛质控样品的梯度浓度为：80、300、800 ng/mL，AR-C124910XX质控样品的梯度浓度范围为40、150、400 ng/mL；

（2）样品处理：分别取等体积的校正标样、质控样品、待测样品、空白人正常血浆，分别向校正标样、质控样品、待测样品中加入内标工作溶液，空白人正常血浆中加入等体积水；向上述每个混合液中分别加入乙腈，混匀，离心，取上清液，通过0.22μm滤膜过滤，得到提取物，待测；

（3）标准曲线制作：将步骤（2）得到的校正标样的提取物进行HPLC分析测定，分别以替格瑞洛、AR-C124910XX和内标的色谱峰面积比为纵坐标，以替格瑞洛、AR-C124910XX的浓度为横坐标制作标准曲线；

（4）定量分析：取待测样品按照步骤（2）的方法处理，并进行HPLC分析测定，并按步骤（3）所得的标准曲线方程计算，得到待测样品中替格瑞洛、AR-C124910XX的浓度；

其中，HPLC分析测定血浆样品中替格瑞洛、AR-C124910XX的浓度，测定条件如下：

检测器：赛诺菲Thermo Ultimate 3000；

色谱柱：菲罗门Synergi™ Polar-RP phenyl 80 Å，150 x 4.6 mm, 4 µm；

流动相A：乙腈；

流动相B：水；

等度洗脱，洗脱程序为：A：B＝42：58；

柱温：40℃；

检测波长：300 nm；

流速：1.0 mL/min；

进样量：40μL。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（4）中结果计算具体为：按公式(1)计算样品中替格瑞洛的浓度；按公式(2)计算样品中AR-C124910XX的浓度；

Y＝0.0063X+0.0819 (1)

Y＝0.0128X+0.0481 (2)

式中：

Y：待测物与内标物质的峰面积之比；

X：待测物的浓度，单位为ng/mL。