[发明专利]一组检测HPV高危型和中危型核酸的探针及其检测试剂盒和应用

说明书

本发明公开了一组检测HPV高危型和中危型核酸的探针，如SEQ ID NO:1‑28所示序列中的至少一条。为放大荧光信号，本发明的探针组还可包含桥连探针。本发明还公开了探针在检测HPV高危型和中危型核酸中的应用和检测试剂盒。试剂盒中的预杂交液由Tris、Tween‑20、BSA、MgCl₂、NaCl和甲酰胺组成；杂交液由硫酸葡聚糖、Tris、Tween‑20、BSA、MgCl₂、NaCl和甲酰胺组成；洗涤液由Tris、Tween‑20、BSA、MgCl₂和甲酰胺组成。本发明的探针在检测多重基因型别时可减少探针的数量，实现同时检测HPV高危型和中危型中的任意一种或多种基因型别，且具较高的灵敏性。

技术领域

本发明涉及分子检测技术领域，具体涉及一组检测HPV高危型和中危型核酸的探针及其检测试剂盒和应用。

背景技术

HPV感染是宫颈癌发病的主要原因，但并不是所有HPV感染都能诱发宫颈癌病变，只有在感染高危型HPV，且一直处于活跃状态的HPV，才能有机会诱发宫颈癌的病变。所以检测活跃期、高危型的HPV具有较大的临床意义。

FISH-Flow是将荧光原位杂交和流式细胞相结合的一种技术，可同时检测细胞基因和蛋白的表达。相比实时荧光定量PCR，不需对细胞进行核酸提取，减少人员操作造成的误差。

探针是FISH-Flow检测的重要工具，根据碱基互补配对原则，合成长约20nt与之相互补的寡核苷酸序列作为探针。

现有的针对高危型HPV探针的设计，基本上是在相同区域设计通用探针，如果通用探针不能覆盖全部基因型别时，则对单个基因型别单独设计探针。根据WHO国际癌症研究机构，HPV需检测13种高风险基因型别(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)和5种中风险基因型别(HPV26、53、66、73、82)。经序列比对结果，18种基因型别的重叠区域较少，这可能需要设计数十条或上百条的探针，易造成因探针之间相结合而失去探针的作用。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一组检测HPV高危型和中危型核酸的探针。该探针组能实现同时检测HPV13种高风险基因型别HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68和5种中风险基因型别HPV26、53、66、73、82中的任意基因型别。

本发明的第一个目的是提供了一组检测HPV高危型和中危型核酸的探针，其探针如SEQ ID NO:1-28所示序列中的至少一条。SEQ ID NO:1-28所示序列具体如下：

HPV-1:5’-ACGTGTTCTTGATGATCTGC-3’

HPV-2:5’-TAGAGATCAGTTGTCTCTGG-3’

HPV-3:5’-TGTAGAGTCACACTTRCAACA-3’

HPV-4:5’-TGTGTGCTTTGTACGCACAA-3’

HPV-5:5’-GGTCTTCCAAAGTACGAATG-3’

HPV-6:5’-ATTCCTAGTGTGCCCATTAA-3’

HPV-7:5’-TGTCGCTTAATTGCTCRTGAC-3’

HPV-8:5’-CCTCCCACACCACGGACACACAAAGGACAGTGGGAGG-3’

HPV-9:5’-GGACACAGCGCCCTGTCCAACGAC-3’

HPV-10:5’-TAGATGTTTGTCTCCAGTCCGACACCCACGACACTGTCG-3’