[发明专利]一种VPS39基因K87R突变检测的试剂盒

说明书

本发明公开了一种VPS39基因K87R突变检测的试剂盒，属于生物技术及临床分子诊断技术领域。本发明发现VPS39基因K87R突变能够导致帕金森病的产生，可通过检测VPS39基因K87R突变对帕金森病病因进行诊断。本发明试剂盒基于的方法是联合PCR方法使用的肽PNA荧光探针方法，主要包括用于特异性扩增VPS39基因K87R突变的正向引物，与VPS39基因K87R突变型互补的反向PNA荧光探针引物，序列分别如SEQ ID NO.1、2所示。本发明涉及的试剂盒实验操作简单，费用低廉，结果重复性，敏感性好，是诊断帕金森病遗传学病因及进行基础科学研究的重要手段。

技术领域

本发明涉及生物技术及临床分子诊断技术领域，特别是涉及一种VPS39基因K87R突变检测的试剂盒。

背景技术

帕金森病(Parkinson’s disease，PD)，又称为震颤麻痹(paralysis agitans)，是一种常见的神经系统变性疾病，老年人多见，平均发病年龄为60岁左右，40岁以下起病的青年帕金森病较少见。我国65岁以上人群PD的患病率大约是1.7％。帕金森病最主要的病理改变是中脑黑质多巴胺(dopamine,DA)能神经元的变性死亡，由此而引起纹状体DA含量显著性减少而致病。临床上将PD分为特发性/散发性PD、家族性/遗传性PD、继发性PD和帕金森综合征。到目前为止，帕金森病确切病因尚不十分清楚，且无有效的治疗和治愈手段，因此对于疾病的预防显得尤为重要，而帕金森病多数与遗传相关，对有帕金森病家族史患者进行遗传性筛查显得尤为重要。

目前遗传研究发现，LRRK2、SNCA、VPS35、GCH1、ATXN2、DNAJC13、TMEM230、GIGYF2、HTRA2、RIC3、EIF4G1、UCHL1、CHCHD2以及GBA基因突变能够导致常染色体显性帕金森病的发生；PRKN、PINK1、DJ1、ATP13A2、PLA2G6、FBXO7、DNAJC6、SYNJ1、SPG11、VPS13C、PODXL以及PTRHD1基因突变能够导致隐性常染色体帕金森病的产生；以及RAB39B基因能够导致伴随X染色体帕金森病的发生，然而许多帕金森病患者遗传风险因素未知，同时目前尚无有研究表明VPS39基因突变能够导致帕金森病的发生。

肽核酸(peptide nucleic acids，PNA)是一类以多肽骨架取代糖磷酸主链的DNA类似物。它是在第一代、第二代反义试剂的基础上，通过计算机设计构建并最终人工合成的第三代反义试剂，是一种全新的DNA类似物，即以中性的肽链酰胺2-氨基乙基甘氨酸键取代了DNA中的戊糖磷酸二酯键骨架，其余的与DNA相同，PNA可以通过Watson-Crick碱基配对的形式识别并结合DNA或RNA序列，形成稳定的双螺旋结构。由于PNA不带负电荷，与DNA和RNA之间不存在静电斥力，因而结合的稳定性和特异性都大为提高；不同于DNA与DNA或RNA间的杂交，PNA与DNA或RNA的杂交几乎不受杂交体系盐浓度影响，与DNA或RNA分子的杂交能力远优于DNA/DNA或DNA/RNA，表现在很高的杂交稳定性、优良的特异序列识别能力、不被核酸酶和蛋白酶水解。

本发明采用特异序列的PNA寡聚物作为探针。由于PNA是一种人工合成的核酸的类似物，并且为非手性、不带电荷的分子，避免了寡核苷酸与其靶基因结合时因电荷相互排斥所导致的杂交不稳定性，结合不易受杂交液离子强度的影响，从而显示出极强的杂交优势，大大提高了检测灵敏度。

发明内容

我们在患有帕金森病的家系中通过遗传学手段筛查首次发现VPS39基因K87R突变能够导致帕金森病的产生，因此VPS39基因可用于帕金森病病因的诊断。

本发明的目的在于提供VPS39基因在制备帕金森病病因诊断试剂或诊断试剂盒中的应用，通过检测VPS39基因K87R突变进行帕金森病病因的诊断。即所述的帕金森病病因诊断试剂或诊断试剂盒为VPS39基因K87R突变检测的试剂或试剂盒。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：