[发明专利]中药材中野黄芩苷的含量检测方法

说明书

本发明提供了一种中药材中野黄芩苷的含量检测方法，属于中药领域，本检测方法包括了样品预处理步骤和样品进样检测步骤，所述样品优选灯盏细辛，样品预处理采用乙醇进行提取，进样采用条件为：C18键合填充柱，流动相为乙腈：四氢呋喃：0.1‑0.2％磷酸＝7:14:79，流速为1.0ml/min，柱温40℃，本发明的检测方法适应性更强，减少样品预处理步骤，更准确反映药材中野黄芩苷的含量。

技术领域

本发明属于中药材药材质量控制技术领域，尤其涉及一种中药材中野黄芩苷的检测方法。

背景技术

灯盏细辛(灯盏花)是菊科飞蓬属植物短葶飞蓬Erigeron breviscapus(Vant.)Hand-Mazz的干燥全草，性味辛、微苦，温，具有散寒解表、祛风除湿、活血化瘀、通络止痛之功，用于感冒头痛，风湿疼痛，脑血管意外引起的瘫痪等(《全国中草药汇编》)。

野黄芩苷(灯盏花乙素)是灯盏花Erigeron breviscapus(Vant.)Hand-Mazz中分离出的黄酮类有效成分，可单独成药，现有上市的品种包括注射用灯盏花素，灯盏花素片，灯盏花素滴丸等等，因而灯盏细辛药材中野黄芩苷的含量成为了用以确定灯盏细辛草登记的中药材标志成分。

《中国药典》2015版中记载的测定灯盏细辛含量的方法药材的前处理复杂费时，且用到肝毒性较强的氯仿进行回流提取，高效液相法测定含量的方法适应性不好，经过多次反复验证发现其中野黄芩苷峰纯度不够，包含了另外一个物质飞蓬酯乙的峰，以此测定出来的含量将会虚高，具体见发明内容。

因此需要一种前处理简单方便，毒性低，且能准确测定灯盏细辛中野黄芩含量的方法。

发明内容

本发明提供了一种中药材中野黄芩苷的含量检测方法，所述含量检测方法包括所述中药材的样品预处理阶段和所述样品进样检测阶段，其中所述样品预处理阶段包括样品的乙醇溶解、超声和过滤步骤，得到样品进样液；所述样品进行检测阶段包括将所述样品进样液进行高效液相检测的步骤，所述高效液相条件为：ODS C18填充柱，流动相为四氢呋喃：乙腈：0.1-0.2％磷酸溶液12％-16％：6％-8％：82％-76％，流速为0.5-2.0ml/min，检测UV波长为330nm-350nm，柱温35-45℃。

野黄芩苷是灯盏细辛药材中的活性成分，为确保灯盏细辛药材的质量，保证其临床用药的安全、有效、稳定，发明人建立了一种灯盏细辛药材中野黄芩苷含量的测定方法。

一、中国药典方法存在的问题：

(1)标准品制备：对照品溶液的制备：取野黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。参照《中国药典》2015版

(2)供试品溶液制备：取本品粗粉约0.5g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷适量，加热回流至提取液无绿色，弃去三氯甲烷液；药渣挥去溶剂，连同滤纸筒移入具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，放置1小时，水浴中加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。备用。

(3)液相条件：色谱柱Inertsil ODS-3 5μm 4.6×250mm；以甲醇-0.1％磷酸溶液(40:60)为流动相；柱温：40℃；流速为0.8ml/min，检测波长为335nm。

测定得到灯盏细辛药材的液相图谱，肉眼判断其中的野黄芩苷似乎是一个分离完全的独立的峰，但该峰纯化后，其PDA紫外吸收图与标准品的PDA紫外吸收图图对照显示有差异，因此怀疑药典方法分离的野黄芩苷中含有其他包峰。