[发明专利]一种牙周膜干细胞冻存液及其冻存方法

说明书

本发明涉及干细胞冻存技术领域，特别涉及一种牙周膜干细胞冻存液及其冻存方法。该牙周膜干细胞冻存液包括海藻糖、乙酰胺、DMSO和基础培养基；所述牙周膜干细胞冻存液中各组分的浓度为：海藻糖：500～2000mg/L；乙酰胺：5vt％～20vt％；DMSO：5vt％～15vt％；基础培养基：补足。与常规的细胞冻存液相比，本发明所述冻存液在细胞冻存过程中对细胞损伤作用较小，细胞活率较高，表明本发明所述冻存液冻存效果明显优于常规细胞冻存液。本发明一方面可以在一定程度上降低细胞冻存的成本，另一方面可以避免异源性物质的引入，具有更高的临床安全性。

技术领域

本发明涉及干细胞冻存技术领域，特别涉及一种牙周膜干细胞冻存液及其冻存方法。

背景技术

牙周炎主要是由局部因素引起的牙周支持组织的慢性炎症。发病年龄以35岁以后较为多见，如龈炎未能及时治疗，炎症可由牙龈向深层扩散到牙周膜、牙槽骨和牙骨质而发展为牙周炎。由于早期多无明显自觉症状而易被忽视，待有症状时已较严重，甚至已不能保留牙齿。牙周膜干细胞是来源于牙周膜的成体干细胞，具有自我复制的能力，能产生不同种类的具有特定表型和功能的成熟细胞，能够维持牙周膜的功能的稳定，发挥生理细胞更新和组织修复组织损伤的作用，在维持正常的牙周组织更新和牙周炎组织损伤修复中起到重要的作用。

在细胞使用前通常需要冻存和复苏。冻存的程序为：选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天最好换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用0.25％胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理，然后将细胞收集于离心管中离心(1000r/min，10分钟)，去上清液，加入完全培养基，于4℃预冷15分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为3×106～1×107/mL之间，将上述细胞分装于专用冷冻塑料管中，冷冻管要将盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)。

目前常用的细胞冻存液或市售的细胞冻存液中通常是由胎牛血清或者血清替代物以及二甲基亚砜等物质组成的，但胎牛血清属于异源性物质，成分复杂，并存在引入污染和过敏原的风险，而血清替代物成分也不明确且价格昂贵，不适合于临床应用，特别是在细胞治疗中，异源性蛋白的存在，可能会引起未知的不良反应，严重影响治疗结果。因此，需要提供一种临床安全性高，同时又能很好保持冻存细胞活性的细胞冻存液，用于冻存牙周膜干细胞。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种牙周膜干细胞冻存液及其冻存方法。该牙周膜干细胞冻存液在细胞冻存过程中对牙周膜干细胞损伤作用较小，细胞活率较高，同时可以避免异源性物质的引入，具有更高的临床安全性。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种牙周膜干细胞冻存液，其特征在于，包括海藻糖、乙酰胺、DMSO和基础培养基；所述牙周膜干细胞冻存液中各组分的浓度为：

海藻糖：500～2000mg/L；

乙酰胺：5vt％～20vt％；

DMSO：5vt％～15vt％；

基础培养基：补足。

作为优选，牙周膜干细胞冻存液中各组分的浓度为：

海藻糖：500～1500mg/L；

乙酰胺：10vt％～20vt％；

DMSO：10vt％；

基础培养基：补足。

优选地，牙周膜干细胞冻存液中各组分的浓度为：

海藻糖：1000～1500mg/L；