[发明专利]一种脂肪间充质干细胞的保存液

说明书

本发明提供了一种脂肪间充质干细胞的保存液，包括：聚乙二醇、葡聚糖和人血白蛋白。本申请提供的脂肪间充质干细胞的保存液是一种不含动物血清和二甲基亚砜的脂肪间充质干细胞冻存液，利用该保存液冻存的细胞长时间保存后依然具有较高的复苏率，不影响细胞生长特性，复苏后细胞保持干细胞的多样性的特点。

技术领域

本发明涉及干细胞保存技术领域，尤其涉及一种脂肪间充质干细胞的保存液。

背景技术

干细胞是一类原始且未特化的多潜能细胞，具有自我复制的能力。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。脂肪间充质干细胞是干细胞中的一种重要类型，脂肪间充质干细胞是近年来从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞，具有可迅速扩增、不易衰老等一般干细胞的特点。人体脂肪间充质干细胞是目前广泛应用于组织工程及再生医学领域的一种成体干细胞，与骨髓间充质干细胞一样具有多向分化潜能。脂肪间充质干细胞呈成纤维细胞样生长，胞浆和核仁丰富，呈平行或漩涡样排列。

正常情况下脂肪间充质干细胞在体外培养时会不停生长分裂从而导致最终衰老和功能丧失，此外，人脂肪间充质干细胞体外长期培养传代容易发生自发分化，失去其多向分化的潜能，而且不间断的培养方式保存也会造成过高的培养成本以及细菌和病原体污染的可能性。为了保证实验的连续性，合理有效利用以及备份足够量的细胞资源，人们需要将有用的细胞种子资源保存起来以供日后方便使用，以及在需要时用于科学研究和临床治疗。

目前，常用的冻存液主要含有二甲基亚砜(DMSO)、胎牛血清(FBS)和基础培养基。DMSO是细胞保存中最常用的冷冻剂，但它对细胞也存在一定的毒性，常温下能使胞内蛋白变性，从而使冻存的人脂肪间充质干细胞受到损伤，甚至对人脂肪间充质干细胞的存活率造成不利，造成冻存效果不佳。

FBS是细胞保存中最常用的保外保护剂，然而动物来源的血清存在感染病毒病菌等病原体的风险，而且间充质干细胞在接触胎牛血清时会内吞血清物质，当使用胎牛血清保存的间充质干细胞回输人体后，其中的一些蛋白质可能会导致异源蛋白引起的免疫排斥反应，使得间充质干细胞移植后成功率降低的同时，导致不良反应的发生，严重的可能引起过敏性休克。除此之外，血清存在批次之间差异和不稳定性等问题。

因此，现有的脂肪间充质干细胞的保存液存在长时间保存复苏率下降与生长状态不良的缺陷。

发明内容

本发明解决的技术问题在于提供一种脂肪间充质干细胞的保存液，该保存液可使细胞长时间保存后依然具有高复苏率，不影响细胞生长特性。

有鉴于此，本申请提供了一种脂肪间充质干细胞的保存液，包括：聚乙二醇、葡聚糖和人血白蛋白。

优选的，所述保存液中还包括非必需氨基酸。

优选的，所述保存液中包括：5vol％～10vol％的聚乙二醇、0.5wt％～2wt％的葡聚糖、0.5wt％～1.5wt％的非必需氨基酸、余量的人血白蛋白。

优选的，所述聚乙二醇的含量为6.5vol％～8.8vol％。

优选的，所述葡聚糖的含量为0.8wt％～1.2wt％。

优选的，所述非必需氨基酸的含量为0.9wt％～1.2wt％。

优选的，所述保存液的制备方法为：

将葡聚糖溶解于生理盐水中过滤后再除菌，然后与聚乙二醇、人血白蛋白混合。