[发明专利]C肽免疫原及其单克隆抗体对及该抗体对在C肽磁微粒化学发光免疫试剂中的应用

说明书

本发明提供一种C肽免疫原，包括第一完全抗原和第二完全抗原，其中第一完全抗原为C肽N端氨基酸序列与载体蛋白偶联而得，第二完全抗原为C肽C端氨基酸序列与载体蛋白偶联而得；第一完全抗原的C肽N端氨基酸序列为C肽全长序列中的1‑12位序列，第二完全抗原的C肽C端氨基酸序列为C肽全长序列中的18‑31位序列。通过现有的合成方法即可获得抗原，并且为可用的完全抗原，制备方法简单，得到的完全抗原结构稳定；而由此通过动物免疫得到的单克隆抗体对能够分别特异性结合C肽的N端及C端，结合位点距离较远，因此不会因为空间位阻导致无法配对的情况出现，可以满足开发C肽磁微粒化学发光免疫诊断试剂及其它免疫学诊断试剂对抗体的需求。

技术领域

本发明涉及免疫诊断技术领域，具体涉及一种C肽免疫原及其单克隆抗体对。

背景技术

C肽是胰岛细胞分泌产物，与胰岛素有一个共同的前体胰岛素原，如图5所示，一个分子的胰岛素原经过酶切后，裂解成一个分子的胰岛素和一个分子的C肽。C肽是由31 个氨基酸组成的直链多肽，其在体内清除率慢，几乎不被肝脏摄取且不受外源胰岛素影响，可以反应内生胰岛素的水平。

C肽检测可以协助判定糖尿病分型；C肽检测不受胰岛抗体干扰，可以判断胰岛素治疗患者的胰岛功能；可以鉴别低血糖发生原因、有助于胰岛细胞瘤的诊断及手术效果判断；还可以根据血中C肽与胰岛素比值，判定肝肾疾病。

目前临床常用的C肽检测方法主要有放射免疫分析、酶联免疫分析、化学发光免疫分析等。这些技术都建立在抗原与抗体特异性相互性作用基础上，特异性的抗体对是这些检测方法的核心原材料。

C肽是由31个氨基酸组成的直链多肽，属于小分子半抗原。首先，C肽免疫原性低，在抗体制备中需要与大分子链接合成完全抗原，常用的方法如中国专利CN201210555678.7及CN201810058354.X所公开的方法均采用融合表达蛋白的方法，这些方法需要基因合成、载体构建、原核表达、纯化等，操作复杂，且融合蛋白中的载体蛋白容易改变目标蛋白的结构。其次，C肽只有31个氨基酸，且其肽链中部具有优势表位，采用完整分子获得的单克隆抗体与抗原的结合点大都集中在中部区域，常常由于空间位阻力导致无法配对，影响其在诊断试剂开发中的应用。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种C肽免疫原，其易于制备，且便于获取单克隆抗体对。

本发明的技术方案是提供一种C肽免疫原，包括第一完全抗原和第二完全抗原，其中第一完全抗原为C肽N端氨基酸序列与载体蛋白偶联而得，第二完全抗原为C肽C端氨基酸序列与载体蛋白偶联而得，第一完全抗原的载体蛋白与第二完全抗原的载体蛋白可以相同或者不同；第一完全抗原的C肽N端氨基酸序列为C肽全长序列中的1-12位序列，第二完全抗原的C肽C端氨基酸序列为C肽全长序列中的18-31位序列。

本发明还提供利用上述抗原通过动物免疫方法获得的单克隆抗体对。

本发明的另一目的是提供上述单克隆抗体对在C肽磁微粒化学发光免疫试剂中的应用。

上述载体蛋白包括牛血清蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、血蓝蛋白(KLH)。

上述第一完全抗原和第二完全抗原中的载体蛋白相同。

上述第一完全抗原中C肽N端氨基酸序列具有连接载体蛋白的连接基GGC，具体序列如SEQ ID NO:1所示，SEQ ID NO:1：EAEDLQVGQVELGGC，第二完全抗原中C端氨基酸序列具有连接载体蛋白的连接基CGG，具体序列如SEQ ID NO:2所示，SEQ ID NO:2：CGGAGSLQPLALEGSLQ。其中连接基GGC或CGG作为与载体蛋白偶联时提供连接臂及提供巯基。

用于检测上述单克隆抗体对结合位点的14个短肽，其序列如SEQ ID NO:3至SEQID NO:16所示。

SEQ ID NO:3：EAEDLQVGQVELGGGPG