[发明专利]一种免疫亲和微流控芯片—质谱联用装置及其在牛奶中抗生素残留分析中的应用

权利要求书

1.一种免疫亲和微流控芯片—质谱联用装置，其特征在于，包括基于恒流注射泵的自动进样单元、牛奶样本前处理单元、基于免疫亲和技术的在线富集单元、磁控分离与样品洗脱单元和电喷雾质谱分析单元；

所述微流控芯片置于恒流注射泵和电喷雾质谱之间，所述具微流控芯片上设有若干个并联平行微通道，所述微通道上设有样本进口和样本出口，所述样本进口通过连接管与进样针相连；所述样本出口通过连接管和毛细管与电喷雾质谱相连；所述微通道靠近进口的一端为样本前处理区域；所述微通道的中间的区域为样品混合和反应区域；所述微通道靠近样本出口的一端为磁分离区域和样品洗脱区域，在磁分离区域和样品洗脱区域的正下方设有磁铁；所述的牛奶样本前处理单元为多孔微/纳米材料填充柱、原位合成的阵列柱、商品化多孔膜或高分子聚合物。

2.微流控芯片的制作方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将微流控芯片通道图案打印到透明胶片上；

(2)通过光刻刻蚀技术将上述图案转移到0.5-200微米厚的SU-8负光胶的铬层玻璃基片上，并得到微流控芯片的玻璃凸面模板；

(3)将聚二甲基硅氧烷预聚物的聚合体和交联剂充分混合，真空脱气后浇筑于玻璃凸面模板上，加热固化，形成PDMS膜；

(4)将PDMS膜从玻璃凸面模板剥离后，打孔，与玻璃片一起进行氧等离子体亲水处理，并贴合，形成封闭微通道；

(5)将连接管插入微流控芯片的进出口，并与恒流注射泵和电喷雾质谱相连，即得到所述微流控芯片。

3.权利要求1所述免疫亲和微流控芯片—质谱联用装置在检测牛奶中抗生素残留分析中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将含有已知量内标物的待测牛奶样本、提取试剂、中和试剂、缓冲溶液和抗体功能化磁性微球溶液用恒流注射泵通过样本进口推入样本混合区域，流速为1～20μL/min，其中流速比为待测牛奶样本：提取试剂：中和试剂：缓冲溶液：抗体功能化磁性微球溶液＝1：1：(1-10)：(1-10)：(1-20)，时长5～30min，反应后的磁性微球被逐渐固定在磁分离区域和样品洗脱区域，形成长度为1～20mm，宽度为0.1～1mm的填充床；

(2)将清洗液以5～20μL/min的流速从样本进口流入微流控芯片通道进行冲洗；

(3)将洗脱液以0.5～5μL/min的流速从进口流入磁分离区域和样品洗脱区域，将富集的抗生素从磁性微球上解离并流出；

(4)微流控芯片流出的抗生素洗脱液通过电喷雾质谱实时监测，以质谱峰信号的相对强度或离子流的相对强度来定量，以特定目标峰的分子量以及二级质谱来定性。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的抗生素包括喹诺酮类药物、磺胺类药物、β-内酰胺类药物、四环素类药物、氯霉素类药物。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述待测牛奶样本的制法为：

(1)预先将牛奶样本中加入已知量的内标分子，即与所测定抗生素同类别的¹³C或D同位素标记的抗生素分子；

(2)对牛奶样本进行稀释。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(1)中，所述提取试剂的流速与待测牛奶样本流速一致。

8.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述提取试剂优选为三氯乙酸溶液、乙腈或者乙醇；所述缓冲溶液为PBS缓冲溶液。