[发明专利]一种具有广谱抗菌活性的细菌素Gr17及其应用

权利要求书

1.一种细菌素Gr17，所述的细菌素Gr17的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.权利要求1所述的细菌素Gr17在制备针对如下细菌的抑菌产品和/或杀菌产品中的应用：李斯特菌（Listeria monocytogenes）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aereu）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、热死环丝菌（Brochothrixthermosphacta）、大肠杆菌（Escherichia coli）、粪肠球菌（Enterococcus faecalis）、绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa）、阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）、白色念珠菌（Candida albicans）。

3.权利要求1所述的细菌素Gr17的生产方法，所述的方法包括如下步骤：

（1）发酵所述细菌素Gr17的生产菌株屎肠球菌Gr17，分离发酵液；

（2）硫酸铵沉淀发酵液后透析获得细菌素Gr17粗品；

（3）离子交换层析法提纯细菌素Gr17粗品获得细菌素Gr17精制品

（4）HPLC提纯细菌素Gr17精制品获得细菌素Gr17纯品；

所述屎肠球菌Gr17菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号 CGMCC No.16677。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，发酵生产菌株屎肠球菌Gr17的方法为：

（1）将屎肠球菌Gr17接种在MRS培养基中，在37℃下培养至OD 600 = 0.3～0.6，获得种子液，培养过程不搅拌；

（2）按体积比0.5％比例接种种子液到MRS培养基中，在37℃下发酵培养24小时，培养过程不搅拌。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的硫酸铵沉淀发酵液后透析的方法为：使用4％硫酸铵溶液沉淀上清液，用超纯水透析脱盐。

6.根据权利要求3-5任一所述的方法，其特征在于，所述的离子交换层析法提纯粗品的步骤为：

（1）用pH5.5的20mM磷酸盐缓冲液平衡SP-Sepharose Fast Flow阳离子交换柱，加样，然后用0M NaCl到1M NaCl的线性梯度洗脱，流速为1 mL / min，收集40min处级分；

（2）用pH5.5的20mM磷酸盐缓冲液平衡Sephadex 层析柱，加样，然后用20mM磷酸盐缓冲液以0.5mL / min的流速洗脱，收集30min处的级分。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的HPLC提纯细菌素Gr17精制品的步骤为：

使用C18反相柱，流动相为含有0.1％三氟乙酸的95％水-5%乙腈至含有0.1％三氟乙酸的5％水-95%乙腈，进行线性梯度洗脱，流速为0.5mL/min，在280nm处监测吸光度，收集20min处的级分。

8.发酵生产肠球菌素Gr17的屎肠球菌Gr17菌株，所述的菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），地址，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC No.16677。

9.权利要求8所述的屎肠球菌Gr17菌株在制备抑菌和/或杀菌产品中的应用。