[发明专利]一种利用白浅灰链霉菌Ah11601生产四烯化合物的方法

说明书

一种利用白浅灰链霉菌Ah11601生产四烯化合物的方法，包括如下步骤：取10‑70g可溶性淀粉，置于900mL水中糊化，然后加入葡萄糖10‑50g、酵母膏2‑6g、蛋白胨2‑6g、磷酸二氢钾2‑6g、硫酸镁1‑4g、氯化钠0.5‑2g、碳酸钙0.5‑2g，搅拌溶解，然后加水定容至1000mL；调节pH灭菌，得到发酵培养基备用；将活化的白浅灰链霉菌Ah11601单菌落接种至100mL活化种子培养基中，在26℃、140rpm下摇床发酵培养48h，再接种至发酵培养基中，接种量占培养基体积的5％，然后在27℃、180rpm下摇床培养144h即可。本方法步骤简单易操作，四烯化合物产率高。

技术领域

本发明涉及一种利用白浅灰链霉菌Ah11601生产四烯化合物的方法。

背景技术

放线菌是一类具有复杂形态分化的革兰氏阳性细菌，广泛分布在各种环境中，其产生的四烯化合物可以作为农用抗生素，其具有高效、低残留和环境友好等优点。尤其是链霉菌属能产生多种四烯化合物，用于植物病害防治有着广阔的前景。

但是利用链霉菌发酵生产各种活性物质一方面受到营养因素的影响，如碳源、氮源、碳氮比、矿物盐、微量元素、维生素等，也受到发酵工艺条件的影响，如受培养时间、pH、温度、溶氧等，目前利用链霉菌生产四烯化合物的方法大多产率低，步骤复杂，不利于大规模投入生产。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种利用白浅灰链霉菌Ah11601生产四烯化合物的方法，其步骤简单而且产率高。

为解决上述技术问题本发明提供了一种利用白浅灰链霉菌Ah11601生产四烯化合物的方法，包括如下步骤：

(1)取10-70g可溶性淀粉，置于900mL去离子水中加热糊化，形成均匀的半透明状淀粉糊化液；

(2)取葡萄糖10-50g、酵母膏2-6g、蛋白胨2-6g、磷酸二氢钾2-6g、硫酸镁1-4g、氯化钠0.5-2g、碳酸钙0.5-2g，加入步骤(1)制得的淀粉糊化液中，保持步骤(1)的糊化温度搅拌溶解，然后冷却至室温并用去离子水定容至1000mL；

(3)向步骤(2)定容后的液体中添加0.1mol/L的磷酸溶液，将其pH 调节为5.6-7，然后在121℃下灭菌20min，得到白浅灰链霉菌Ah11601发酵培养基备用；

(4)取经过活化的白浅灰链霉菌Ah11601单菌落，接种至100mL活化种子培养基中，在26℃、140rpm下摇床发酵培养48h，得到新鲜种子液；

(5)将新鲜种子液接种至步骤(3)制得的白浅灰链霉菌Ah11601发酵培养基中，接种量占培养基体积的5％，然后在27℃、180rpm下摇床培养144h 即可。

作为优选的，所述的步骤(1)中取可溶性淀粉20-60g，所述的步骤(2) 中取葡萄糖20-40g、酵母膏2-5g、蛋白胨3-5g、磷酸二氢钾3-6g、硫酸镁 1-3g、氯化钠0.5-1.5g、碳酸钙0.5-1.5g，步骤(3)中调节pH为5.6-6.2。

作为优选的，所述的步骤(1)中取可溶性淀粉40g，所述的步骤(2)中取葡萄糖30g、酵母膏4g、蛋白胨4g、磷酸二氢钾4g、硫酸镁2g、氯化钠 1g、碳酸钙1g，步骤(3)中调节pH为5.6。

作为优选的，所述的活化种子培养基中各组分所占质量百分比为：葡萄糖15％、淀粉5％、蛋白胨0.5％、酵母粉0.5％、磷酸二氢钾0.5％、硫酸镁0.2％、氯化钠0.1％，其余为水，活化种子培养基的pH为6.8-7.0，接种前需要将活化种子培养基在121℃下灭菌20min。

为简单说明问题起见，以下对本发明所述的一种利用白浅灰链霉菌 Ah11601生产四烯化合物的方法均简称为本方法。