[发明专利]基于碳量子点的荧光免疫分析方法

权利要求书

1.荧光碳量子点，其特征在于，所述荧光碳量子点按如下方案I或II制备得到：

方案I：将3-5g柠檬酸和5-7g硫脲加入到15-20mL水中，搅拌使化合物溶解，将混合液置于微波反应器中，800-1000W功率下加热7-10min，直至溶液从无色变为深棕色固体，然后冷却至室温，加入25mL水溶解，所得碳量子点溶液经过滤、透析及色谱柱纯化，即得；

方案II：将3-5g柠檬酸和5-7g尿素加入到15mL水中，搅拌使化合物溶解，将混合液置于微波反应器中，800-1000W功率下加热7-10min，直至溶液从无色变为深棕色固体，然后冷却至室温，加入25mL水溶解，所得碳量子点溶液经过滤、透析及色谱柱纯化，即得。

2.根据权利要求1所述的荧光碳量子点，其特征在于，所述荧光碳量子点按如下方案I′或II′制备得到：

方案I′：将5g柠檬酸和7g硫脲加入到15mL水中，搅拌使化合物溶解，将混合液置于微波反应器中，800W功率下加热7分钟，直至溶液从无色变为深棕色固体，然后冷却至室温，加入25mL水溶解，所得碳量子点溶液经过滤、透析及色谱柱纯化，即得；

方案II′：将3g柠檬酸和5g尿素加入到15mL水中，搅拌使化合物溶解，将混合液置于微波反应器中，800W功率下加热7分钟，直至溶液从无色变为深棕色固体，然后冷却至室温，加入25mL水溶解，所得碳量子点溶液经过滤、透析及色谱柱纯化，即得。

3.根据权利要求1所述的荧光碳量子点，其特征在于，所述过滤采用0.22μm膜过滤；和/或

所述透析使用型号为3500Da的透析膜在超纯水中透析至少24h；和/或

所述色谱柱为Sephadex G25柱。

4.根据权利要求1-3任一项所述的荧光碳量子点，其特征在于，方案I制备的荧光碳量子点的激发波长为370-380nm，发射波长为520-530nm，优选激发波长为370nm，发射波长为520nm；方案II制备的荧光碳量子点的激发波长为400-410nm，发射波长为515-525nm，优选激发波长为400nm，发射波长为515nm。

5.权利要求1-4任一项所述荧光碳量子点的以下任一应用：

①制备生物探针、生物传感器以及催化领域中的应用；

②在免疫分析中的应用。

6.基于碳量子点的荧光免疫分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、用人工抗原包被酶标板的各反应孔；

S2、向反应孔中加入特异性抗体和待测样品溶液，孵育一段时间后，向反应孔中加入孔辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记的二抗，继续孵育；

S3、向反应孔中加入辣根过氧化物酶底物3,3’,5,5’-四甲基联苯胺溶液或碱性磷酸酶底物4-硝基苯磷酸二钠溶液，进行显色反应；

S4、显色反应结束后，向反应孔中加入权利要求1-4任一项所述荧光碳量子点，检测荧光强度；

S5、配制不同浓度的小分子半抗原标准品溶液，按照S2-S4进行检测，建立反映荧光强度与小分子半抗原浓度之间关系的标准曲线；

S6、根据待测样品溶液的检测结果，对照标准曲线，获得待测样品溶液中小分子半抗原的浓度。