[发明专利]天竺黄中氨基酸含量的检测方法及天竺黄的等级分类方法

说明书

本发明提供了一种天竺黄中氨基酸含量的检测方法及天竺黄的等级分类方法。检测方法：以40％～60％乙醇水溶液为溶剂，对天竺黄进行浸提，再以异硫氰酸苯酯为衍生化试剂对提取液进行衍生处理，只有采用HPLC法测定：氨基酸色谱柱，梯度洗脱；流动相A为0.1mol/L、pH 6.5的醋酸钠缓冲液与乙腈以90～95:10～5混合，流动相B为乙腈与水以3.5～4.5:1混合；波长250～260nm。本发明能够对天竺黄中的至少15种氨基酸进行定量检测，检测结果还可以作为判断天竺黄质量优劣的指标；本发明还能寻找出天竺黄颜色与氨基酸含量、竹红菌甲素含量的关联性，得到不同颜色天竺黄的质量优劣顺序。

技术领域

本发明涉及中药分析领域，尤其是涉及一种天竺黄中氨基酸含量的检测方法及天竺黄的等级分类方法。

背景技术

目前天然天竺黄在临床上因其功效显著，倍受临床中医们的青睐。但市场上的天然天竺黄药材质量良莠不齐，现有鉴定标准比较粗略，给临床大夫的精准用药带来了巨大困难。目前鉴定天然天竺黄药材质量优劣的标准主要是以2015年版《中国药典》标准，根据其记载，天然天竺黄为禾本科植物青皮竹Bambusa textilis McClure或华思劳竹Schizostachyum chinense Rendle等杆内的分泌液干燥后的块状物，主要是以体积比、吸水量、显色反应、薄层鉴别的方法进行鉴定。

天然天竺黄达到了2015年版《中国药典》标准，从国家法律法规层面来说，其药材质量是合格的，但是如何进一步区分合格天竺黄药材质量的优劣，对于有效帮助临床大夫解决精准用药困难的问题至关重要，因而需要升级现有标准并建立天然天竺黄品质鉴定分级标准，以给合格天竺黄划分等级。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种天竺黄中氨基酸含量的检测方法，该检测方法能够对天竺黄中的至少15种氨基酸进行定量检测，并且检测结果准确度高、灵敏度高、检测速度快。

本发明的第二目的在于提供天竺黄的等级分类方法，该分类方法能够对满足标准的合格天竺黄更精细化的等级分类，既能用于区分质量优劣，又能帮助临床精准用药。

为了实现以上目的，本发明提供了以下技术方案：

一种天竺黄中氨基酸含量的检测方法，包括下列步骤：

以40％～60％乙醇水溶液为溶剂，对天竺黄进行浸提，得到氨基酸提取液；

以异硫氰酸苯酯为衍生化试剂对所述氨基酸提取液进行衍生处理，得到衍生样品；

采用HPLC法测定所述衍生样品中的氨基酸含量，再计算出天竺黄中氨基酸含量；

所述HPLC法的色谱条件：

氨基酸色谱柱，

改变流动相A与流动相B的体积比进行梯度洗脱；

所述流动相A为0.1mol/L、pH 6.5的醋酸钠缓冲液与乙腈以90～95:10～5的体积比混合，所述流动相B为乙腈与水以3.5～4.5:1的体积比混合；

波长250～270nm，优选250～262nm。

本发明先利用乙醇水溶液浸提天竺黄中的氨基酸，然后进行衍生化，最后采用HPLC法定量检测。

其中，浸提溶剂、衍生化试剂选择以及HPLC的色谱条件均是结果准确性的关键因素。本发明通过优化以上因素可以实现对至少15种氨基酸的提取、定量检测，包括谷氨酸(Glu)，天冬酰胺(Asn)，谷氨酰胺(Gln)，天冬氨酸(Asp)，丝氨酸(Ser)，精氨酸(Arg)，苏氨酸(Thr)，丙氨酸(Ala)，脯氨酸(Pro)，γ-氨基丁酸(GABA)，缬氨酸(Val)，异亮氨酸(Ile)，亮氨酸(Leu)，色氨酸(Trp)，赖氨酸(Lys)。