[发明专利]抗人β2

说明书

本发明涉及新型的抗人β2‑微球蛋白抗体及其应用，属于免疫化学领域。本发明制备了多种抗体，并进行配对筛选，获得灵敏度及特异性均能满足需求的抗体组合(BM12及BM17)；同时其方便大量生产，可满足日后大规模临床应用的需求。对上述抗体组合进行检测体系的调试优化工作，获得操作简便，灵敏度，特异性及相关检测性能可满足人临床样本检测的人β2‑微球蛋白的胶体金快速检测试纸卡的产业化应用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体的涉及两种抗人β₂-微球蛋白抗体及其制备方法以及上述抗体在人β₂-微球蛋白定量检测中的应用。

背景技术

β₂-微球蛋白(β₂-microglobulin，β₂-MG)是一种由淋巴细胞、血小板、多形核白细胞产生的一种内源性小分子球蛋白，分子量为11.8kDa；由99个氨基酸组成的单链多肽，在免疫应答中起重要作用；是细胞表面人白细胞抗原的β链部分，分子内含有二硫键，不含糖，与免疫球蛋白的结构相似。

β₂-MG广泛存在于血浆、尿液、脑脊液、唾液以及初乳中。血清β₂-MG的合成速度和细胞膜释放的量是非常恒定的，从而使β₂-MG含量保持稳定水平。正常人β₂-MG可以从肾小球自由滤过，99.9％在近端肾小管吸收并在肾小管上皮细胞中分解破坏，因此正常尿液中排出量很微量。在肾小球滤过功能受损或滤过负荷增加的情况下，血液中的β₂-MG含量增加；而尿液中排出的β₂-MG含量增加，则提示肾小管损害或滤过负荷增加。对于肾移植病人，β₂-MG检测则可预示机体是否发生排斥反应。尿β₂-MG还有助于鉴别上、下尿路感染。综上所述，β₂-MG是一种具有较高临床应用价值的检测指标。

测定β2-MG的方法有酶联免疫吸附分析法(ELISA)、放射免疫分析法(RIA)、免疫透射比浊法、免疫散射比浊法、微粒子酶免疫分析法。酶联免疫吸附分析法重复性差，适合大批量检测。放射免疫分析法和放射比浊法由于核素有半衰期，试剂有效期短；此外核素有放射污染，而且核素实验室的建设须经防疫部门的监督，操作人员亦须经过特殊训练，不易普及，在测定时还需要昂贵的免疫测定仪；免疫透射比浊法特异性高，方法简单、快速，无放射污染，结果稳定性、重复性满足临床要求。但在抗原、抗体比例不同时，如出现前带或后带现象，对测定结果有较大的影响。此外，在高血脂存在的情况下，脂蛋白的小颗粒可形成浊度，使测定值假性升高，因此测定时尽量不用脂血标本。

发明内容

本发明采用胶体金法，该法快速、简便，易操作，自动化程度高，且与ELISA法、免疫比浊法等均具有很好的相关性，临床应用非常广泛，与其他方法检测试剂比较，通用性较强，而这其中首要解决的技术问题是提供一组能有效的、特异性结合人β₂-MG的抗体。更具体地说：

本发明的第一目的在于提供两种抗人β₂-MG抗体。

第一种抗人β₂-MG抗体(BM12)，

其重链可变区含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：1所示的HCDR1、如序列SEQ ID NO：2所示的HCDR2和如序列SEQ ID NO：3所示的HCDR3；

以及其轻链可变区序列含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：4所示的LCDR1、如序列SEQ ID NO：5所示的LCDR2和如序列SEQ ID NO：6所示的LCDR3。

优选的是本发明中BM12抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。

第二种抗人β₂-MG抗体(BM17)，