[发明专利]一株γ-聚谷氨酸高产菌株及利用该菌株进行液体发酵制备γ-聚谷氨酸的方法

权利要求书

1.一株γ-聚谷氨酸高产菌株，其生物保藏编号为CGMCCNo.16159；命名为YJY18-11，属于枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）；其16S rDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1 所示。

2.利用权利要求1所述γ-聚谷氨酸高产菌株进行液体发酵制备γ-聚谷氨酸的方法，包括如下步骤：

（1）菌种活化：将4℃条件下保存在LB培养基上的试管斜面菌种移至室温条件下活化4h-8h；

（2）液体种子制备：在无菌操作台上，用无菌接种环接种1-3个单菌落于装有灭菌LB培养基中，培养16h后将其转接到灭菌的种子培养基的三角瓶中，培养温度30-37℃，转速160-200rpm，培养16-24h至对数生长期；

（3）发酵、诱导过程：将步骤（2）中的种子液以v/v 5-10%的接种量接种于发酵罐，500L发酵罐发酵培养基装液量为200-300L，发酵温度为30-37℃，罐压0.01-0.05Mpa，转速300-400rpm，当发酵至15-20h后，开始流加培养基，通过葡萄糖的反馈调节流加培养基的速度，控制葡萄糖的终浓度为0.1%-0.3%，总发酵时间为65-80h。

3.根据权利要求2所述的液体发酵制备γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于：

每升液体种子培养基组成为：葡萄糖 15-30g/L，酵母膏5-10g/L，谷氨酸钠15-30g/L，K₂HPO₄·3H₂O 1.5-3 g/L，MgSO₄ 0.25-0.5g/L，蒸馏水1000mL，pH 7.0-7.5。

4.根据权利要求2所述的液体发酵制备γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于：

每升液体培养基组成：葡萄糖20-60g/L，谷氨酸钠 30-70 g/L，NH₄Cl 5-20 g /L，MnSO₄•H₂O 0.01-0.1 g/L，MgSO₄ 0.01-0.2 g/L，K₂HPO₄•3H₂O 10-40 g/L，pH 7.5-9，加水至1000mL；

所述流加培养基每升组成：葡萄糖50-100 g/L，磷酸氢二钾 1-10g/L，硫酸镁0.1 -2g/L，氯化铵10 -50 g/L，谷氨酸钠50-100 g/L，加水至1000mL。