[发明专利]一种异鲁米诺功能化MOFs检测β-淀粉样蛋白的电化学发光免疫传感器的制备方法

权利要求书

1.一种异鲁米诺功能化MOFs检测β-淀粉样蛋白的电化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将直径为4 mm的玻碳电极用氧化铝粉打磨抛光至镜面，再用超纯水洗涤干净；

（2）将6 µL、浓度为4～10 mg/mL金功能化四氧化三铁-聚吡咯复合物的水溶液滴涂到电极表面，室温保存至干燥；

（3）继续滴涂6 μL、浓度为1 μg/mL的β-淀粉样蛋白捕获抗体标准溶液于玻碳电极表面，4 ºC冰箱中保存至干燥，超纯水清洗；

（4）继续滴涂3 μL、质量分数为1%的牛血清白蛋白，封闭非特异性活性位点，4 ºC冰箱中保存至干燥，超纯水清洗；

（5）继续将6 μL、浓度为10 fg/mL～100 ng/mL的一系列不同浓度的β-淀粉样蛋白标准溶液滴涂在电极表面，4 ºC冰箱中保存至干燥，超纯水清洗；

（6）将6 μL所制得的异鲁米诺功能化钴基MOFs与金纳米粒子以及检测抗体的复合物滴涂到电极表面，4 ºC冰箱中保存至干燥，超纯水清洗，即制得检测β-淀粉样蛋白的电化学发光免疫传感器。

2.如权利要求1所述的一种异鲁米诺功能化MOFs检测β-淀粉样蛋白的电化学发光免疫传感器的制备方法，所述异鲁米诺功能化钴基MOFs与金纳米粒子以及检测抗体的复合物，其特征在于，制备步骤如下：

（1）制备异鲁米诺功能化钴基MOFs

将0.1～0.5 mmol异鲁米诺与0.3～0.7 mmol 2-氨基对苯二甲酸加入到15 mL N，N-二甲基甲酰胺中，搅拌均匀后滴加1 mL、质量分数为1%的戊二醛，避光条件下磁力搅拌48小时，然后加入0.3～0.8 mmol硝酸钴，100～140 ºC油浴搅拌下反应2～8小时，离心后获得沉淀，用乙醇、超纯水各洗涤三次后置于真空干燥箱，60 ºC干燥后得到异鲁米诺功能化钴基MOFs；

（2）制备异鲁米诺功能化钴基MOFs与金纳米粒子的复合物

将0.5 mL邻苯二甲酸二乙二醇二丙烯酸酯加入到3 mL超纯水中，超声5分钟使其分散均匀，然后加入5 mg所制备的异鲁米诺功能化钴基MOFs，振荡12小时后离心并与10 mL带负电的金纳米粒子溶液混合，再振荡12小时后得到异鲁米诺功能化钴基MOFs与金纳米粒子的复合物；

（3）制备异鲁米诺功能化钴基MOFs与金纳米粒子以及检测抗体的复合物

将离心后的异鲁米诺功能化钴基MOFs与金纳米粒子的复合物分散到1 mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，加入1 mL、1 μg·mL^-1的β-淀粉样蛋白检测抗体，4 ºC下振荡孵化12小时，离心后分散到1 mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，加入10 μL、质量分数为1%的牛血清白蛋白封闭非特异性活性位点。

3.如权利要求1所述的一种异鲁米诺功能化MOFs检测β-淀粉样蛋白的电化学发光免疫传感器的制备方法，所述金功能化四氧化三铁-聚吡咯复合物，其特征在于，制备步骤如下：

（1）制备四氧化三铁纳米颗粒

将3～7 mmol三氯化铁分散到40 mL乙二醇中，然后加入44 mmol醋酸钠和1 g聚乙二醇，搅拌30分钟后转移至反应釜中，180～200 ºC反应5～10小时后，通过磁性分离得到四氧化三铁纳米颗粒；

（2）制备金功能化四氧化三铁-聚吡咯复合物

将50 mL超纯水通氮气20分钟后加入0.066 g十二烷基苯磺酸钠和0.025 g四氧化三铁纳米颗粒，搅拌15分钟；随后，加入吡咯搅拌1小时；最后，逐滴加入5.0 mL、0.1～0.4 mol·L^-1的三氯化铁溶液，室温下搅拌12～24小时后磁性分离得到四氧化三铁-聚吡咯复合物；称取10 mg四氧化三铁-聚吡咯复合物分散到1 mL超纯水中，再与40 mL金纳米粒子溶液混合，振荡5小时后通过磁性分离得到金功能化四氧化三铁-聚吡咯复合物，用乙醇、超纯水各洗涤三次后置于真空干燥箱，60 ºC干燥。

4.如权利要求2和权利要求3所述的金纳米粒子溶液，是将1 mL、质量分数为1%的氯金酸溶液稀释到100 mL超纯水中，加入2.5 mL、质量分数为1%的柠檬酸三钠搅拌至沸腾后制得的。