[发明专利]一种对胚胎培养液进行DedscRRBS-PGS分析的方法

权利要求书

1.一种构建用于胚胎植入前染色体筛查的测序文库的方法，包括以下步骤：

1)将囊胚培养液作为样本构建DNA文库；

所述构建DNA文库的过程中采用两种限制性内切酶对所述囊胚培养液的基因组DNA酶切；

2)将所述DNA文库利用重亚硫酸盐进行CT转化，得到转化产物；

3)将转化产物用于制备甲基化测序文库，得到测序文库。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述胚胎植入前染色体筛查为检测DNA甲基化和染色体非整倍性状况。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

步骤1)中，所述两种限制性内切酶为MspI/ApeKI、MspI/TaqαI、MspI/XmaI、XmaI/TaqαI、XmaI/ApeKI、ApeKI/TaqαI中的任意一种组合。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：

步骤1)中，所述将囊胚培养液作为样本构建DNA文库包括如下步骤：

a)裂解所述囊胚培养液获得基因组DNA；

b)用MspⅠ和ApeKI酶切所述基因组DNA，得到酶切产物；

c)对所述酶切产物依次进行末端修复和接甲基化接头，得到DNA文库。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：

步骤2)中，所述将转化产物用于制备甲基化测序文库为将所述转化产物扩增，得到扩增产物即为甲基化测序文库；

和/或，所述扩增具体包括如下步骤：

1)用引物对所述转化产物进行第一次扩增，得到第一次扩增产物；

2)以所述第一次扩增产物为模板，用所述引物进行第二次扩增。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：

所述囊胚培养液按照如下方法制备：将离体受精卵在卵裂球培养基中培养到卵裂球期，然后转移至囊胚培养基中培养至囊胚成熟阶段，收集囊胚培养液。

7.一种对胚胎培养液进行简化代表性重亚硫酸盐测序和染色体非整倍性状况分析的方法，包括以下步骤：a)按照权利要求1-6任一所述方法制备甲基化测序文库；b)将所述甲基化测序文库进行高通量测序，根据测序结果分析DNA甲基化和染色体非整倍性状况。

8.一种试剂盒，包括限制性内切酶为MspⅠ和ApeKI、所述CT转化采用的重亚硫酸盐转化试剂、Universal primer及Index primer；

所述试剂盒为具有如下1)和/或2)功能：

1)构建用于胚胎植入前染色体筛查的测序文库；

2)对胚胎培养液进行简化代表性重亚硫酸盐测序和染色体非整倍性状况分析。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：

所述试剂盒还包括记载权利要求1-7任一所述的方法的可读载体。

10.权利要求8或9所述的试剂盒在制备对胚胎培养液进行DNA甲基化和染色体非整倍性状况分析产品中的应用；

或，权利要求8或9所述的试剂盒在制备胚胎植入前筛查产品中的应用；

或，权利要求8或9所述的试剂盒在制备胚胎发育研究产品中的应用；

或，权利要求8或9所述的试剂盒在制备评估胚胎的发育潜能中的应用；

或，权利要求1-5中所述的方法在对胚胎培养液进行简化代表性重亚硫酸盐测序和染色体非整倍性状况分析中的应用；

或，权利要求1-6中所述的方法在对胚胎植入前筛查中的应用；

或，权利要求1-6中所述的方法在评估胚胎的发育潜能中的应用。