[发明专利]一种含脂肪干细胞分泌物的脂质体及其制备方法

说明书

本发明公开了一种含脂肪干细胞分泌物的脂质体的制备方法，其包括如下工艺步骤：1)将大豆卵磷脂与胆固醇共同溶于热无水乙醇溶液中，得混合溶液；2)将吐温‑80溶于含脂肪干细胞分泌物培养液中，磁力搅拌并加热至40℃，得混合培养液；3)将步骤1)所得混合溶液缓慢滴加到步骤2)所得混合培养液中，40℃恒温磁力搅拌10～20min，得乳化脂质体悬浮液；4)将步骤3)所得乳化脂质体悬浮液减压旋转蒸发，进行超声混匀处理，得成品。本发明采用乙醇注入法制备含有脂肪干细胞分泌物的脂质体，并通过完善原料配比及工艺参数获得包封率较高的脂质体，其包封率可达67％，且有良好的稳定性。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，特别涉及一种含脂肪干细胞分泌物的脂质体。

背景技术

脂肪干细胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)是脂肪组织中一类多能干细胞，其含 量丰富，易于分离，供区易被患者接受，近年来作为热受追捧的间充质干细胞，在再生医学 和临床工作中已受到了广泛的关注与应用。研究表明ADSC具有强大的旁分泌功能，可以产 生多种生长因子，激活临近细胞或组织而产生相应的生物学作用，在抗衰老、伤口愈合等方 面具有显著的作用。可促进成纤维细胞增殖及胶原的分泌，使真皮内胶原含量增加，分泌大 量新的细胞外基质成分，从而修复原有的真皮层弹性纤维断裂，重建、修复皮肤结构，达到 皮肤真皮变厚、皮肤弹性增加，从而改善皮肤质地。

我们通过将含有脂肪干细胞分泌物的培养液添加到衰老皮肤成纤维细胞中，发现其能显 著提高皮肤成纤维细胞的活性，促进I型胶原蛋白的合成，具有修复皮肤的作用。但该培养 液中的有效成分大多为生物大分子物质，一般难以透过皮肤，如何更好地发挥脂肪干细胞分 泌物培养液的作用，使其能更好地应用于实际生产中是目前需要解决的问题。

脂质体是一种可以自组形成的囊性空泡状载体，可以包裹水性介质溶解的溶质，保护溶 质的活性；脂质体与细胞有着相似的磷脂双层膜结构，可以提高物质的渗透作用，从而进入 皮肤的深层。

发明内容

本发明的目的在于针对上述现有技术的不足，提供一种含脂肪干细胞分泌物的脂质体的 制备方法。本发明所制备的含脂肪干细胞分泌物的脂质体，既可以修复衰老损伤细胞，也可 以促进皮肤吸收，提高生物利用率，有效推动干细胞新制剂的研发。

本发明所采取的技术方案是：一种含脂肪干细胞分泌物的脂质体的制备方法，其包括如 下工艺步骤：

1)将大豆卵磷脂与胆固醇共同溶于热无水乙醇溶液中，搅拌直至大豆卵磷脂和胆固醇 溶解，得混合溶液；

2)将吐温-80溶于含脂肪干细胞分泌物培养液中，磁力搅拌并加热至40℃，恒温继续 搅拌直至吐温-80溶解均匀，得混合培养液；

3)将步骤1)所得混合溶液缓慢滴加到步骤2)所得混合培养液中，40℃恒温磁力搅拌 10～20min，得乳化脂质体悬浮液；

4)将步骤3)所得乳化脂质体悬浮液减压旋转蒸发，去除残留乙醇，后进行超声混匀处 理80～100s，得成品。

作为上述方案的进一步改进，步骤1)中所述的大豆卵磷脂与胆固醇的原料质量份比为 6:1。

作为上述方案的进一步改进，步骤1)中所述的热无水乙醇溶液的温度为55～65℃。

作为上述方案的进一步改进，步骤2)中所述的吐温-80与大豆卵磷脂的原料质量份比 为8:25。

作为上述方案的进一步改进，步骤3)中所述的缓慢滴加的滴加速度为500μL/min。

作为上述方案的进一步改进，步骤3)中所述的搅拌速度为500r/min。

作为上述方案的进一步改进，步骤4)中所述的减压旋转蒸发的条件为转速60r/min、温 度50℃。