[发明专利]一种提高菌株产2-酮基-D-葡萄糖酸速率的发酵工艺

权利要求书

1.一种提高菌株产2-酮基-D-葡萄糖酸速率的发酵工艺，其特征在于，包括步骤：

1）菌株斜面培养活化；

将菌种接种于斜面培养基，28~37℃条件下，静置培养16~36小时；所述菌株为粘质沙雷氏菌SDSPY-623菌株；

2）种子培养；

将步骤1）培养的菌株，在无菌条件下，用接种环接1~2环于液体种子培养基中，置于摇床上，35~38℃、转速为180~220转/分钟，培养8~16小时，得种子液；

3）发酵培养；

10L发酵罐发酵：

以10%体积比的接种量，将种子液接种于罐装有7L发酵培养基的10L发酵罐中，前8h控制温度在37℃，转速为300转/分钟，通气量为0.6Nm³/h，8h后控制温度在30℃，转速为500转/分钟，通气量为0.9Nm³/h，发酵液初始pH值为6.8-7.0，当发酵液的pH低于5.3时，采用Ca(OH)₂溶液作为中和剂，维持发酵液的pH在6.8-7.0，发酵过程中，间隔定时取样测定发酵液中的葡萄糖和2-KGA的浓度，当发酵液中葡萄糖浓度不再降低，2-KGA浓度不再上升时，结束发酵，发酵周期为27小时；

或补料分批发酵：

以9%的体积比的接种量，将种子液接种于罐装有4L发酵培养基的10L发酵罐中，前8h控制温度在37℃，转速为300转/分钟，通气量为0.6Nm³/h，8h后控制温度在30℃，转速为500转/分钟，通气量为0.9Nm³/h，发酵液初始pH值为6.8~7.0，发酵过程中，当发酵液的pH低于5.3时，采用Ca(OH)₂溶液作为中和剂，维持发酵液的pH在6.8~7.0；当葡萄糖浓度降至40g/L时，补加60g/L葡萄糖，间隔定时取样测定发酵液中的葡萄糖和2-KGA的浓度，当发酵液中葡萄糖浓度不再降低，2-KGA浓度不再上升时，结束发酵，发酵时间为 32小时；

所述发酵培养基的组成为：葡萄糖180~200 g/L，玉米浆8~12 g/L，磷酸二氢钾 0.5~1.5 g/L，无水硫酸镁 0.3~0.5 g/L，硫酸亚铁 0.03~0.04 g/L，氯化钴0.002~0.004 g/L，钼酸铵 0.002~0.004 g/L，硼酸0.0005~0.0015 g/L，硫酸锌0.0005~0.0015 g/L，烟酸0.002~0.004 g/L，碳酸钙15~25 g/L，pH6.5~7.2，自来水配制；

4）离心步骤3）所得的发酵液，测定上清液中葡萄糖和2-KGA的含量。

2.如权利要求1所述提高菌株产2-酮基-D-葡萄糖酸速率的发酵工艺，其特征在于，所述斜面培养基的组成为：蛋白胨3~6 g/L，氯化钠3~6 g/L，牛肉膏1~4 g/L，pH值7.0，蒸馏水配制。

3.如权利要求1所述提高菌株产2-酮基-D-葡萄糖酸速率的发酵工艺，其特征在于，所述液体种子培养基的组成为：蛋白胨3~6 g/L，氯化钠3~6 g/L，牛肉膏1~4 g/L，pH值7.0，蒸馏水配制。

4.如权利要求1所述提高菌株产2-酮基-D-葡萄糖酸速率的发酵工艺，其特征在于：步骤1）中，静置培养18~22小时。

5.如权利要求1所述提高菌株产2-酮基-D-葡萄糖酸速率的发酵工艺，其特征在于：步骤2）中，摇床培养9~11小时。