[发明专利]精子特异miRNAs在辅助生殖体外受精诊断中的应用

说明书

本发明公开了一种精子特异miRNAs在制备辅助生殖体外受精的诊断试剂或诊断试剂盒中的应用，所述精子特异miRNAs为hsa‑miR‑191‑5p、hsa‑miR‑499a‑5p、hsa‑miR‑132‑3p或hsa‑miR‑29a‑3p中的一种或几种。本发明还公开了一种精子特异miRNAs在制备用于预测或评估辅助生殖体外受精过程中精子生育力的分子标志物的应用。本发明的精子特异miRNAs可以作为精子特异性的分子标志物、辅助生殖体外受精的诊断试剂或诊断试剂盒等，以用于预测精子生育力，从而为辅助生殖体外受精中的男性不育治疗以及临床诊断提供可靠的科学依据与个性化治疗的思路。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，是关于一种精子特异miRNAs在辅助生殖体外受精诊断中的应用。

背景技术

microRNAs(miRNAs)是一类小的、单链非编码小RNA(small noncoding RNAs,sncRNAs)，长度为20-23nt，可以通过与靶mRNA的3’UTR的不完全配对，在转录后水平介导基因沉默，从而实现翻译抑制或是靶mRNAs的降解。目前，miRNAs是研究较多的一类sncRNAs，许多研究证实miRNAs可以作为精子质量预测及诊断的潜在生物标志物。在非梗阻性无精子症(NOA,non-obstructive azoospermia)患者睾丸内miRNAs的表达发生改变，意味着miRNAs可在精子发生过程中发挥作用。对少弱精症患者精子进行microarray检测，发现许多miRNAs的表达发生变化，进一步的生物信息学分析表明，它们可能参与精子发生过程。此外，还有研究发现，在无精症患者精浆内，有3个miRNAs(miR-141,miR-429,miR-7-1-3p)的表达发生变化，它们可能参与NOA相关的甲基化-miRNA-基因调控网络。这些结果表明，miRNAs在雄性生殖系统中发挥重要作用，但其目前尚未有miRNA对正常精子的评估及预测。

现有对辅助生殖体外受精(in vitro fertilization，IVF)过程中精子生育力预测的技术手段和方法，主要集中在检测精液参数、精液ROS值、精子DNA碎片率等。但是，现有的方法仅检测精子相关参数，没有和胚胎质量相关联，无法全面、真实、准确地评估精子生育力。因此现有的方法仅对精子质量做出判断，但对精子的生育力评价不足，临床上IVF的成功率仅为30％左右，成本高(在生殖中心进行一次IVF花费约在3万人民币左右)等。

发明内容

本发明选取IVF病人中正常男性精液样本87例，通过对精液样本进行优化以及精液质量检测，选取符合标准的正常精子样本，根据其对应优质胚胎率(good qualityembryo，GQE)情况，分为H-GQE((GQE≥75％，high，H-GQE，n＝23；GQE≤25％，low，L-GQE，n＝64)，然后进行精子RNA提取，最后对通过小RNA高通量测序方法检测miRNAs表达水平。通过小RNA高通量测序后，共检测到389个miRNAs，并分析两组表达差异后，共得到4个差异表达miRNAs。最后通过数据分发现，这4个miRNAs对87例样本的区分效率可以达到71.54％。

因此，本发明的首要目的是提供精子特异miRNAs在制备辅助生殖体外受精的诊断试剂中的应用。本发明的第二个目的是提供精子特异miRNAs在制备辅助生殖体外受精的诊断试剂盒中的应用。本发明的第三个目的是提供精子特异miRNAs在制备用于预测或评估辅助生殖体外受精过程中精子生育力的分子标志物的应用。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

作为本发明的第一个方面，精子特异miRNAs在制备辅助生殖体外受精的诊断试剂中的应用，所述精子特异miRNAs为hsa-miR-191-5p、hsa-miR-499a-5p、hsa-miR-132-3p或hsa-miR-29a-3p中的一种或几种。