[发明专利]检测某种动物病原抗体的ELISA试剂盒

权利要求书

1.检测某种动物病原抗体的ELISA试剂盒，其特征在于：包括预包被板、经过标记酶标记的待测抗体、包被缓冲液、洗涤缓冲液、终止液、底物缓冲液、TMB使用液、ABTS使用液，所述预包被板为96孔聚苯乙烯板。

2.根据权利要求1所述的检测某种动物病原抗体的ELISA试剂盒，其特征在于：所述标记酶为辣根过氧化物酶。

3.根据权利要求1所述的检测某种动物病原抗体的ELISA试剂盒，其特征在于：所述包被缓冲液为pH值为9.6的碳酸盐缓冲液，所述包被缓冲液由1.59g的Na₂CO₃、2.93g的NaHCO₃和1000mL的蒸馏水混合制得。

4.根据权利要求1所述的检测某种动物病原抗体的ELISA试剂盒，其特征在于：所述洗涤缓冲液为pH值为7.4的磷酸缓冲盐溶液，所述洗涤缓冲液由0.2g的KH₂PO₄、2.9g的Na₂HPO₄、Na₂HPO₄·12H₂O、0.8g的NaCl、0.2g的KCl、0.5mL的浓度为0.05％的吐温20和1000mL的蒸馏水混合制得。

5.根据权利要求1所述的检测某种动物病原抗体的ELISA试剂盒，其特征在于：所述终止液为H₂SO₄溶液，所述终止液由178.2mL的蒸馏水和21.8mL的浓度为98％的浓硫酸混合制得。

6.根据权利要求1所述的检测某种动物病原抗体的ELISA试剂盒，其特征在于：所述底物缓冲液为pH值为5.5的磷酸枣柠檬酸，所述底物缓冲液由25.6mL浓度为28.4g/L的Na₂HPO₄、24.4mL浓度为19.2g/L的柠檬酸和50mL的蒸馏水混合制得。

7.根据权利要求1所述的检测某种动物病原抗体的ELISA试剂盒，其特征在于：所述TMB使用液由0.5mL浓度为2mg/mL的TMB无水乙醇溶液、10mL底物缓冲液和35μL的浓度为0.75％的双氧水混合制得，所述ABTS使用液由0.5mg的ABTS、1mL底物缓冲液和2μL的浓度为3％的双氧水混合制得。

8.检测某种动物病原抗体的ELISA试剂盒进行检测的方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1：包被：用包被缓冲液将待测抗体稀释至蛋白质含量为5μL/mL，在预包被板反应孔的内部加入0.1mL的稀释后的溶液，将预包被板置于4℃的冰箱内，经过12h后取出，去除预包被板反应孔内部的溶液，且用洗涤缓冲液冲洗4次，每次4分钟；

S2：添加样品：加入0.1mL的待测抗体稀释后的溶液至已包被的预包被板上的反应孔内部，将预包被板放置在37℃的孵育箱的内部，经过1h后取出，然后用洗涤缓冲液洗涤4次，每次4分钟；

S3：添加待测抗体：向预包被板上的反应孔的内部添加0.1mL的新鲜稀释后的待测抗体，将预包被板放入37℃的孵育箱的内部，经过1h后取出，用洗涤液冲洗4次，每次4分钟；

S4：添加底物液显色：向预包被板上的反应孔的内部添加0.1mL的刚配置的TMB使用液，将预包被板置于37℃的孵育箱的内部，经0.5h后取出；

S5：结束反应：向预包被板上的反应孔内部添加0.05mL的终止液；

S6：判定结果：以ABTS显色，于410nm处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。