[发明专利]有机磷降解酶OPHC2突变体及其应用有效

专利信息
申请号: 201811625972.4 申请日: 2018-12-28
公开(公告)号: CN109679933B 公开(公告)日: 2020-09-15
发明(设计)人: 李光雷;李立功 申请(专利权)人: 北京森根比亚生物工程技术有限公司
主分类号: C12N9/16 分类号: C12N9/16;C12N15/55;C12N15/81;C12N1/19;A62D3/02;C12R1/84;A62D101/04;A62D101/28
代理公司: 北京思元知识产权代理事务所(普通合伙) 11598 代理人: 余光军;杨惠
地址: 101407 北京市怀*** 国省代码: 北京;11
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摘要:
搜索关键词: 有机磷 降解 ophc2 突变体 及其 应用
【权利要求书】:

1.一种有机磷降解酶OPHC2突变体,其特征在于:其是将SEQ ID NO.2所示的野生型有机磷降解酶OPHC2的第226位氨基酸由亮氨酸突变为组氨酸得到的突变体。

2.权利要求1所述有机磷降解酶OPHC2突变体的编码基因。

3.按照权利要求2所述的编码基因,其特征在于,所述编码基因的核苷酸序列为SEQ IDNO.3所示。

4.一种有机磷降解酶OPHC2突变体,其特征在于:其是将SEQ ID NO.2所示的野生型有机磷降解酶OPHC2的第239位氨基酸由苯丙氨酸突变为异亮氨酸得到的突变体。

5.权利要求4所述有机磷降解酶OPHC2突变体的编码基因。

6.按照权利要求5所述的编码基因,其特征在于,所述编码基因的核苷酸序列为SEQ IDNO.4所示。

7.一种有机磷降解酶OPHC2突变体,其特征在于:其是将SEQ ID NO.2所示的野生型有机磷降解酶OPHC2的第226位氨基酸由亮氨酸突变为组氨酸以及将第239位氨基酸由苯丙氨酸突变为异亮氨酸得到的突变体。

8.权利要求7所述有机磷降解酶OPHC2突变体的编码基因。

9.按照权利要求8所述的编码基因,其特征在于,所述编码基因的核苷酸序列为SEQ IDNO.5所示。

10.含有权利要求2、3、5、6、8或9所述编码基因的重组表达载体。

11.权利要求1、4或7所述的有机磷降解酶OPHC2突变体在降解拟除虫菊酯类农药中的用途。

12.一种制备权利要求1、4或7所述有机磷降解酶OPHC2突变体的方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)将编码权利要求1、4或7所述有机磷降解酶OPHC2突变体的基因克隆到酵母表达质粒上,构建酵母表达重组质粒;(2)将酵母表达重组质粒线性化,转化酵母感受态细胞,获得重组酵母菌株;(3)高密度发酵培养所述重组酵母菌株,诱导表达相应的蛋白,分离纯化,即得。

13.按照权利要求12所述的方法,其特征在于,步骤(3)所述重组酵母菌株的接种量为8%-10%;发酵全程的温度为30℃,菌体生长阶段的pH值为5.0,进入诱导期后的pH值为5.2-5.5。

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