[发明专利]有机磷降解酶OPHC2突变体及其应用有效
申请号: | 201811625972.4 | 申请日: | 2018-12-28 |
公开(公告)号: | CN109679933B | 公开(公告)日: | 2020-09-15 |
发明(设计)人: | 李光雷;李立功 | 申请(专利权)人: | 北京森根比亚生物工程技术有限公司 |
主分类号: | C12N9/16 | 分类号: | C12N9/16;C12N15/55;C12N15/81;C12N1/19;A62D3/02;C12R1/84;A62D101/04;A62D101/28 |
代理公司: | 北京思元知识产权代理事务所(普通合伙) 11598 | 代理人: | 余光军;杨惠 |
地址: | 101407 北京市怀*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 有机磷 降解 ophc2 突变体 及其 应用 | ||
1.一种有机磷降解酶OPHC2突变体,其特征在于:其是将SEQ ID NO.2所示的野生型有机磷降解酶OPHC2的第226位氨基酸由亮氨酸突变为组氨酸得到的突变体。
2.权利要求1所述有机磷降解酶OPHC2突变体的编码基因。
3.按照权利要求2所述的编码基因,其特征在于,所述编码基因的核苷酸序列为SEQ IDNO.3所示。
4.一种有机磷降解酶OPHC2突变体,其特征在于:其是将SEQ ID NO.2所示的野生型有机磷降解酶OPHC2的第239位氨基酸由苯丙氨酸突变为异亮氨酸得到的突变体。
5.权利要求4所述有机磷降解酶OPHC2突变体的编码基因。
6.按照权利要求5所述的编码基因,其特征在于,所述编码基因的核苷酸序列为SEQ IDNO.4所示。
7.一种有机磷降解酶OPHC2突变体,其特征在于:其是将SEQ ID NO.2所示的野生型有机磷降解酶OPHC2的第226位氨基酸由亮氨酸突变为组氨酸以及将第239位氨基酸由苯丙氨酸突变为异亮氨酸得到的突变体。
8.权利要求7所述有机磷降解酶OPHC2突变体的编码基因。
9.按照权利要求8所述的编码基因,其特征在于,所述编码基因的核苷酸序列为SEQ IDNO.5所示。
10.含有权利要求2、3、5、6、8或9所述编码基因的重组表达载体。
11.权利要求1、4或7所述的有机磷降解酶OPHC2突变体在降解拟除虫菊酯类农药中的用途。
12.一种制备权利要求1、4或7所述有机磷降解酶OPHC2突变体的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将编码权利要求1、4或7所述有机磷降解酶OPHC2突变体的基因克隆到酵母表达质粒上,构建酵母表达重组质粒;(2)将酵母表达重组质粒线性化,转化酵母感受态细胞,获得重组酵母菌株;(3)高密度发酵培养所述重组酵母菌株,诱导表达相应的蛋白,分离纯化,即得。
13.按照权利要求12所述的方法,其特征在于,步骤(3)所述重组酵母菌株的接种量为8%-10%;发酵全程的温度为30℃,菌体生长阶段的pH值为5.0,进入诱导期后的pH值为5.2-5.5。
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