[发明专利]一种测定总胆汁酸的试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种测定总胆汁酸的试剂盒及方法，试剂盒包括第一试剂，所述第一试剂包括：甘氨酸、三乙醇胺、ProClin150、甘露醇和Thio‑NAD；方法包括以下步骤：1)按原料组分及含量分别溶解第一试剂和第二试剂；2)将溶解的第一试剂加入待测样品中；3)加入溶解的第二试剂；4)测定溶液中Thio‑NADH的吸光度；本发明提供了一种精密度、准确性均较高且稳定的测定总胆汁酸的试剂盒及方法。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种测定总胆汁酸的试剂盒及方法。

背景技术

总胆汁酸(total bile acid，TBA)是胆固醇在肝脏分解及肠-肝循环中的一组代谢产物，是胆固醇在肝脏分解代谢的最终产物，与胆固醇的吸收、代谢及调节关系密切。人体的总胆汁酸分为初级胆汁酸和次级胆汁酸两大类。初级胆汁酸以胆固醇为原料，参与脂肪的消化吸收。其经过胆道系统进入十二指肠后，在肠道细菌作用下经水解反应生成次级胆汁酸。当肝细胞发生病变或肝内外阻塞时，胆汁酸代谢发生障碍反流入血，血清总胆汁酸浓度升高。因此，总胆汁酸水平变化可敏感地反映肝脏功能。血清总胆汁酸是肝实质性损伤及消化系统疾病的一个较为灵敏的诊断指标。总胆汁酸能较为特异地反映肝排泄功能，一旦肝细胞有病变或肠-肝循环障碍，均可引起总胆汁酸升高。

血清总胆汁酸增高:可见于各种急慢性肝炎、乙肝携带者或酒精性肝炎(TBA对检出轻度肝病的灵敏度优于其他所有肝功能试验)，还可见于绝大部分肝外胆管阻塞和肝内胆汁淤积性疾病、肝硬化、阻塞性黄疸等。

在众多的总胆汁酸(TBA)检测试剂盒中，主要有以下几种方法：

1.气液色谱法测定血清胆汁酸的改进Sep-Pak C_(18)Cartridge小柱对血清胆汁酸作液固萃取,以具有去结合作用的七氟丁酐作衍生化试剂,快速而精密地测定血清中胆酸、鹅去氧胆酸、去氧胆酸、石胆酸和熊去氧胆酸五种胆汁酸的填充柱气液色谱分析法。

2.酶学偶联测定方法第三代试剂原理，是血清中总胆汁酸在NAD+存在下，3α-HSD作用于3-α羟基生成中间产物3-酮类固醇，NAD+被还原为NADH。在黄素酶的存在下，NADH氧化为NAD+，而共存的NBT还原为甲潜衍生物。甲潜衍生物的生成量与血清中总胆汁酸含量成正比。

3.第四代试剂原理，胆汁酸被3α羟基类固醇脱氢酶(3a-HSDH)及口-硫代烟酰胺嘌呤二核苷酸氧化型特异性的氧化，生成3酮类固醇及}硫代烟酰胺嘌呤二核苷酸还原型。此外，生成的3酮类固醇在3α羟基类固醇脱氢酶及β硫代烟酰胺嘌呤二核苷酸还原型存在下，生成胆汁酸及β烟酰胺嘌呤二核苷酸氧化型。以上依据循环酶而放大量的胆汁酸测定生成的β-硫代烟酰胺嘌呤二核苷酸还原型的吸光度，计算血清中胆汁酸的量。

在上述的3种方法中都存在着精密度、准确性、线性范围等方面的问题。

发明内容

针对上述技术问题，本发明提供了精密度、准确性均较高且稳定的测定总胆汁酸的试剂盒及方法。

本发明的第一个方面，一种测定总胆汁酸的试剂盒，包括第一试剂，所述第一试剂包括：甘氨酸、三乙醇胺、ProClin150、甘露醇和Thio-NAD。

优选地，所述甘露醇在所述第一试剂中含量为0.1-1％。

优选地，所述Thio-NAD在所述第一试剂中的含量为0.9-1g/L。

优选地，还包括第二试剂，所述第二试剂包括：三氨基甲烷、吐温80、ProClin150、牛血清白蛋白、还原性辅酶Ⅰ、3α-羟基类固醇脱氢酶、过氧化氢酶和超氧化物歧化酶。

优选地，所述吐温80在所述第二试剂中的含量为0.3-0.8mmol/L。

优选地，所述3α-羟基类固醇脱氢酶在所述第二试剂中的含量为7-10Ku/L。