[发明专利]一种基因测序文库的构建方法

说明书

提供了一种基因测序文库的构建方法，具体涉及基因测序领域，本发明的方法包括将磁性粒子与转座酶包埋复合物结合形成复合体，并用该复合体与待测序的靶DNA样品孵育，产生两端带有接头的DNA文库。

技术领域

本发明涉及测序技术领域，尤其涉及一种基因测序文库的构建方法。

背景技术

二代测序技术(Next Generation Sequence，NGS)以高通量、低成本的优势，自出现之日起就倍受欢迎。随着技术的发展，新一代测序技术在许多科学研究和临床检测方面都有应用。

目前很多科学研究与临床应用需要快速对目标的全基因组进行测序，或者对感兴趣的目标区域进行深度测序；利用RNA-seq发现新的转录组水平上的变异，或者精确定量mRNA的表达量；分析表观遗传学因素，例如DNA的各种甲基化、DNA与蛋白之间的相互作用；对癌症进行准确测序，寻找变异位点，以便用于精准医疗，个体化治疗癌症。

测序技术方面，Illumina公司研发的Miseq、Nextseq和Hiseq等测序仪，采用边合成边测序(Sequencing by Synthesis,SBS)技术，支持大规模平行测序，以高通量、低成本、周期短的优势得到了广泛的欢迎。

在实际利用测序的完成过程中，很多时候对时效性要求相当高，需要在基因检测的每一个环节都尽可能缩短时间。

基于转座酶打断的测序文库构建技术，能够同时实现DNA片段化和接头的添加，此类方法己经有报道，比如中国专利CN105525357B公开了一种利用转座酶包埋复合体进行文库构建的方法，能够极大的减少样品处理的时间。但是，由于通过转座酶实现的DNA片段化与靶DNA的起始量有关，更多的靶DNA起始量会造成转座酶在实现DNA片段化后得到的文库片段更大，不能满足后续测序对于文库片段大小范围的要求；同时，不同起始量的靶DNA进行基于转座酶的文库构建后会得到不同量的DNA文库。因此，目前基于转座酶打断的文库构建，需要一定量的样本进行，并且对最终得到的文库进行精确定量，以便下游进行测序。

常规的均一化方法，通过吸光值高低估算含有DNA量的高低，从而来吸取等量或等比例的样本，实现均一化的目的，然而通过吸光值或荧光定量的方法，会受其他同样吸收特定光谱如蛋白、其他类型核酸或质的影响，而荧光定量存在成本高，操作繁琐费时的缺陷；现有的均一化过程可以定义成定量-计算-吸取三个步骤。定量96个样本的操作时间由于各种仪器平台的不同，由几分钟到3个小时不等；计算环节，录入各样本的浓度并计算具体的吸取样本量，需要耗时约1个小时；调整移液器，从每个样本中独立吸取相应计算量的样本，实现样本之间均一化后进行下游文库构建流程，此过程需要1个小时。因此按照现有的技术流程，整个均一化的过程需要5个小时时间。在进行大批量样本文库构建时，该步骤耗时长且繁琐，虽然现在有自动化仪器的辅助，但随之的成本也将进一步提高。

发明内容

本发明提供一种构建基因测序文库的方法，所述方法包括：

(1)将磁性粒子与转座酶包埋复合物接触，使使得磁性粒子与转座酶包埋复合物形成复合体；其中，每个转座酶包埋复合物包含转座酶，还包含第一接头序列和/或第二接头序列；所述第一接头序列包含第一测序接头序列和转座酶识别序列，所述第二接头序列包含第二测序接头序列和转座酶识别序列；

其中，复合体中的磁性粒子与转座酶之间通过镍离子(Ni2+)-组氨酸相互作用结合；

(2)将(1)中的复合体与靶DNA样品孵育，产生两端带有接头的DNA文库。

根据本发明提供的一种基因测序文库的构建方法，所述方法包括：

(1)磁性粒子与转座酶包埋复合物以一定比例结合形成复合体；

(2)将(1)中的复合体与靶基因孵育；

(3)将复合体从(2)中的反应体系中分离出来；