[发明专利]一种森林脑炎病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种森林脑炎病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒及其制备方法。本发明试剂盒特别适用于国内森林脑炎病毒的早期辅助诊断，其具有特异性强、敏感性高、检测快速、操作方便、成本低廉等优点，适合临床推广。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种医用检测用试剂盒，更具体地涉及一种森林脑炎病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

森林脑炎病毒又称蜱传脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)属于黄病毒属，森林脑炎病毒为球形颗粒，基因组为单股正链RNA，长约11kb，共编码3个结构蛋白即衣壳蛋白(C)、膜蛋白(M)、包膜蛋白(E)和7个非结构蛋白(NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b、NS5)，在3个结构蛋白中，E蛋白是病毒最重要的结构蛋白，其含有多种T细胞表位和B细胞表位，决定着病毒的组织嗜性，介导病毒与细胞膜受体的结合，诱导保护性的免疫反应。森林脑炎病毒至少有3个亚型，即西欧亚型、西伯利亚亚型和远东亚型。该病毒以侵袭中枢神经系统为主的方式引起急性传染病，该病病死率高，预后不好，约25-37％的患者会留下麻痹型后遗症。

目前常用的实验室病原性检测技术主要包括：病毒分离、血清学试验(如补体结合试验、血凝抑制试验等)、分子生物学(如RT-PCR技术等)、ELISA等方法诊断森林脑炎。其中，病毒分离培养需要取脑脊液作病毒分离，且在发病早期阳性率较低，还存在对实验培养条件等要求高、耗时长等缺陷；血清学试验需要检测双份血清效价增加4倍以上有诊断意义，该类方法操作繁琐费时，难于高通量检测，且检测过程中会经常出现假阳性反应；另外，病毒中和试验需要活病毒，所以操作比较困难；而分子生物学方法如RT-PCR也容易出现交叉污染、假阳性，并且还需要昂贵的检测仪器，不利于森林脑炎病毒的临床检测推广。

目前，ELISA法检测森林脑炎病毒IgM类抗体，是早期辅助诊断的主要方法，特异性检测人血清/血浆中IgM类抗体，适用于森林脑炎的早期辅助诊断，其操作简单，容易掌握，不需要昂贵的精密仪器设备，容易得到临床推广。现在，欧洲有多家公司生产该类产品，但分别使用了6种西欧亚型病毒株，测定结果均为定性检测，并且采用了7种不同的判定单位。我国尚没有森林脑炎病毒IgM抗体检测试剂盒上市。

现有产品的制备方法均采用间接ELISA法进行IgM类抗体定性检测。以德国IBL公司森脑病毒IgM抗体检测试剂盒为例，先用灭活全病毒或重组病毒抗原包被酶标板，然后加入待检血清，孵育并洗涤后，加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗人IgM抗体(抗-μ链)，孵育并洗涤后，加入四甲基联苯胺(TMB)底物显色，显色强度与样品中病毒特异性IgM抗体量成正比。

并且，现有的森林脑炎病毒IgM抗体检测试剂盒制备过程中采用的病毒株均为西欧亚型，而我国流行的病毒株为远东亚型，理论上采用现有国外产品用于国内森林脑炎病毒的临床测定会降低测定的特异性；另外，现有的森林脑炎病毒IgM抗体检测试剂盒在制备过程中，为了减少样品中IgG类抗体对测定结果的影响，均在样品稀释液中加入类风湿类因子或抗人IgG抗体，虽然理论上减少了样品中IgG对检测结果的影响，但并不能完全消除其对检测结果的影响，且类风湿类因子或抗人IgG抗体的加入也会导致生产成本的增加、操作步骤的繁复。

因此，为了克服上述缺陷，有必要开发适用于国内森林脑炎病毒早期辅助诊断的森林脑炎病毒IgM抗体检测试剂盒。

发明内容

本发明的目的是提供一种可克服现有技术的缺陷，能够适用于国内森林脑炎病毒临床检测的森林脑炎病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒，其具有特异性强、敏感性高、检测快速、操作方便、成本低廉等优点，其能够用于临床森林脑炎病例的早期辅助诊断。

本发明提供一种森林脑炎病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒，所述试剂盒基于捕获法进行森林脑炎病毒IgM抗体检测。

进一步地，所述试剂盒包括小鼠抗人IgM抗体(抗μ链)、酶标抗体；