[发明专利]一种检测基因突变的试剂盒、方法及其用途

权利要求书

1.一种用于检测来自人的生物样本中基因突变的试剂盒，其特征在于，包括一对能够扩增所述基因的DNA序列的第一引物组，一对能够扩增所述基因转录物的逆转录产物序列的第二引物组，以及由依RNA为模板合成DNA的逆转录酶与依DNA为模板合成DNA的DNA聚合酶组成的混合酶，

其中，所述第一引物组包括第一上游引物和第一下游引物，所述第二引物组包括第二上游引物和第二下游引物，

优选地，所述第一引物组与所述第二引物组扩增所述基因的同一外显子，更优选地，所述第一上游引物和所述第二上游引物相同，所述第一下游引物和所述第二下游引物相同，

优选地，所述转录物为mRNA，所述逆转录产物为cDNA。

2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述第一上游引物和所述第一下游引物中至少有一个是ARMS引物，所述第二上游引物和所述第二下游引物中至少有一个是ARMS引物，

优选地，所述第一上游引物和所述第一下游引物中一个是ARMS引物，另一个是通用引物，更优选地，所述第一上游引物是ARMS引物，所述第一下游引物是通用引物，

优选地，所述第二上游引物和所述第二下游引物中一个是ARMS引物，另一个是通用引物，更优选地，所述第二上游引物是ARMS引物，所述第二下游引物是通用引物，

优选地，所述试剂盒还包括探针，所述探针序列能够与扩增产物结合，更优选地，所述试剂盒还包括阻断DNA序列。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括探针，所述探针能够与突变型基因的扩增产物结合。

4.根据权利要求1-3所述的试剂盒，其特征在于，还包括dNTP、缓冲液，

优选地，还包括内控引物，

优选地，还包括核酸提取试剂，更优选地，所述核酸提取试剂包括DNA提取试剂和RNA提取试剂，更优选地，所述核酸提取试剂可以同时提取DNA和RNA。

5.一种用于检测来自人的生物样本中基因突变的反应体系，其特征在于，所述反应体系中同时包含DNA和RNA，还同时包含依RNA为模板合成DNA的逆转录酶和依DNA为模板合成DNA的DNA聚合酶，

优选地，所述反应体系包含一对能够扩增所述基因的DNA序列的第一引物组，以及一对能够扩增所述基因转录物的逆转录产物序列的第二引物组。

6.一种检测人生物样本中基因突变的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取或获取所述生物样本中的核酸，

(2)对步骤(1)获得的核酸进行检测，

其中，所述生物样本是全血样本，优选地，所述全血样本中包括红细胞、血小板、外泌体，更优选地，所述全血样本不包括白细胞，

优选地，所述核酸为DNA和/或RNA。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述基因为基因，优选地，所述基因选自EGFR、ALK、ROS1、BRAF、KRAS和PD-L1中的至少一种。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述生物样本来自肿瘤患者，更优选地，所述肿瘤为浸润性肿瘤，更优选地，所述肿瘤包括肺癌、甲状腺结节、黑色素瘤、结直肠癌，最优选地，所述肺癌为非小细胞肺癌。

9.根据权利要求6-8任一所述的方法，其特征在于，

任选地，所述步骤(2)是利用定量PCR进行的，优选地，是利用荧光定量PCR进行的，

任选地，所述步骤(2)是利用测序方法进行的，优选地，是利用二代测序或三代测序方法进行的。

10.一种检测生物样本中基因突变的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取或获取所述生物样本中的总核酸，

(2)在同一个反应体系中对步骤(1)获得的总核酸进行检测，

其中，所述总核酸为DNA和RNA，

优选地，所述生物样本为血浆或全血，

优选地，所述生物样本为组织，更优选地，所述组织为新鲜组织或甲醛固定石蜡包埋组织，

优选地，所述生物样本为胸腹水。